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Caryotypage


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#1 Nadim1234

Nadim1234

    Nucléotide

  • Membre confirmé
  • 35 messages

Posté 27 juin 2012 - 05:23

Bonjour!
Mon abscence de ce forum ne marque en rien un désinteressement face au monde microscopique... Je visite d'ailleurs tous les jours ce magnifique forum et tiens à remercier toute la communauté de la merveilleuse passion que vous nous transmettez...
Depuis mes débuts en microscopie, j'ai toujours rêvé de réaliser un caryotype.. Après plusieurs recherches, je suis tombé sur plusieurs protocoles employant tous des techniques sophistiquées que je ne pourrait employer, notamment dans le cadre de la culture des leucocytes. Le reste de l'expérience paraît assez simple, mis à part quelques produits que je ne pourrais trouver. Au final, le protocole se résume à cela:
Faire une culture de leucocytes (assez long et compliqué)
Arrêter les cellules en mitose à l'aide de la colchicine
Les exposer à un milieu hypotonique sur une lame, pour les "gonfler" par choc osmotique
Les fixer (acide acetique et methanol)
Secher la lame et la colorer (giemsa)
Observer, photographier puis classer les chromosomes par paires...
Plusieurs problemes se posent:
- je ne pourrais faire une culture de leucocytes avec les techniques normales.. Je viens pourtant de tomber sur un article (en anglais) qui traite d'un nouveau protocole simple et accessible, mais serait-il approprié au caryotypage?? La technique est "l'instant leucocyte culture system" ( http://www.edigmbh.d...ilcs_info_e.pdf ) mais je n'ai rien trouvé qui traîte de son application au caryotypage...
- le protocole du caryotypage est parsemé de plusieurs centrifugations qui ne servent (apparemment) qu'à obtenir uniquement des leucocytes sur la lame.. Pourrais-je m'en passer?? (je ne cherche pas de résultats 'parfaits'...)
- La colchicine a (d'apres ce que j'ai lu..) les mêmes effets que le froid quand au blocage des mitoses.. Pourrais-je substituer le produit par un passage au refrigérateur?
Sinon, il s'avère que certains médicaments sont composés de colchicine, mais ce sont des plilules et ils contiennent surement d'autres produits...
- Quand au milieu hypotonique,pourrait-il etre composé d'eau distillée??
Pourriez-vous me conseiller?? Quelqu'un aurait-il déjà tenté cette expérience??

Merci beaucoup!!
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