bon, pour la coloration, j'explique d'abord la technique principale que nous utilisons, et nos petites "astuces" pour qu'elles soient réussies.
1. le matériel nécessaire :
- verre de montre, pipettes, plusieurs pinceaux très doux, pinces
- eau de javel du commerce sans additifs, ou DAKIN de pharmacie
- eau distillée, ou eau Volvic (pas pas eau du robinet si elle est calcaire)
- glycérine
- vinaigre blanc
- carmin aluné de grenacher
- vert d'iode.
2. le protocole
- plonger les coupes dans le dakin 10 minutes dans un verre de montre
- rinçage à l'eau, mettre les coupes sur la lamelle
- application vinaigre blanc dilué une fois pendant 3 minutes
- rinçage à l'eau
- application du colorant rouge carmin aluné pendant 10 minutes
- léger rinçage à l'eau
- application vert d'iode pendant 2 minutes
- rinçage à l'eau
- montage à l'eau avec 10 % glycérine
3. Remarques sur le lavage
- Le lavage à l'eau de javel doit être dosé : si la coupe est très fine; 7 8 minutes suffisent, si elle est plus importante, on peut laisser 15 minutes.
- Si votre temps est trop court, les cellules ne seront pas vidées, si elle est trop longue, la structure cellulosique devient molle, la manipulation est plus difficile.
- Faire le lavage dans un verre de montre sur fond Canson noir, c'est plus facile de repérer les coupes.
- Observer à ce stade à la loupe binoculaire, on voit très bien en fin de lavage les coupes qui sont réussies de celle qui le sont moins. Je fais en général une dizaine de coupes, j'en garde deux ou trois pour la suite
- pendant le lavage au dakin, il se forme énormément de bulles, toutes les deux minutes, les enlever en passant un pinceau doux SUR LES DEUX FACES. (c'est pour cela que je fais cette étape sur un verre de montre.
4. remarques sur le rinçage et le tampon acide
- C'est une étape indispensable car le colorant disparaît à l'eau de javel
- il faut rincer la coupe en sortie d'eau de javel, et appliquer le vinaigre pur ou dilué une fois.
- toujours penser, à chaque étape, à utiliser un pinceau pour éliminer les bulles au fur et à mesure, il s'en reforme dans cette étape.
- par pitié, pas avec le même pinceau que celui de l'eau de javel !!!! sinon ...
- si vous ne rincez pas le vinaigre, la coloration rouge est plus intense... et ne tient pas !!!
le carmin aluné tiendra avec un bon rinçage à l'eau non calcaire (j'utilise de l'eau distillée).
5. remarques sur la coloration
- Les temps sont difficiles à donner, car ils dépendent des colorants, de leur âge, de leur concentration.
- mon vert d'iode, par exemple, est trop concentré et je suis obligé de le diluer X4 pour utilisation (c'est mieux d'avoir un colorant dilué pendant deux trois minutes, que concentré pendant 15 secondes, la coloration est plus homogène.
- pour que le carmin aluné tienne, j'ai ajouté sur les dernières préparations un peu de sucre à mon eau de rinçage. ca à l'air de donner des résultats probants.
- toujours bien éliminer des bulles, à chaque fois avec un pinceau spécifique.
Bonne réalisation !!!
6. variante testée et approuvée : la solution alcoolique
Les colorations sont possibles en milieu alcool, car le carmin existe en solution alcoolique et non aqueuse. dans ce cas, j’utilise le bleu de méthylène comme deuxième colorant.
La première partie ne change pas :
- lavage dakin,
- rincage
- tampon vinaigre
- rincage
Ensuite :
- bain alcool 60 degrés
- bain alcool 90 degrés
- application carmin dans l'alcool
- enlever le surplus, mais ne pas rincer.
- application bleu méthylène
- rinçage alcool 60 degré
- rinçage eau distillée
- montage eau 10% glycérine
c'est très important de repasser à l'eau, sinon l'alcool s'évapore bien vite sur la préparation lors de l'observation.
les résultats, vous les connaissez (ici, coupe tige chardon en lumière oblique)
