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Coloration collagène


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3 réponses à ce sujet

#1 GrpTIPE_Limace

GrpTIPE_Limace

    Acide aminé

  • Membre
  • 2 messages

Posté 01 décembre 2015 - 03:46

Bonjour,

Dans le cadre de notre TIPE, nous étudions la bave de limaces et voulons mettre en évidence le collagène présent dans celle-ci. Nous avons recherché sur internet et avons une coloration possible : celle de l'hématoxyline et éosine. Nous aimerions savoir si elle est efficace et si elle correspond à nos attentes. Sinon connaissez vous une autre méthode ? (Avec le protocole s'il vous plaît)

 

Cordialement


  • 0

#2 Tryphon T

Tryphon T

    oooOooo

  • Membre confirmé
  • PipPipPipPipPipPipPipPipPipPip
  • 13 184 messages

Posté 01 décembre 2015 - 07:07

Bonjour,

 

La coloration du collagène n'est pas une mince affaire !

 

Marcel Locquin nous dit : Deux groupes de méthodes:

- celles basées sur la vitesse différentes de diffusion de deux colorants acides en compétition.

- celles qui font appel à la limitation de la pénétration d'un colorant au sein des fibres par les acides Phosphomolybdéniques  ou Phosphotungstiques.

 

PIC-Emalun : Trichrome compétitif au Picro-Indigocarmin-Hémalun

PIC-Pararosaniline :Trichrome compétitif de Ramon et Cajal

PIC-Rouge nucléaire solide.

PIT-Hématoxyline

PIN-Rouge nucléaire solide

PBPP de Gaussen.

 

le TRICHROME DE MASSON et

le PICROSIRIUS

 

Cela me parait un peu compliqué.

 

Amicalement.


  • 0

#3 Dominique.

Dominique.

    Invertébré

  • Membre AUTEUR
  • PipPipPip
  • 373 messages

Posté 01 décembre 2015 - 08:53

     Bonsoir

 

Les fibres collagènes se colorent variablement suivant le colorant

Actuellement  les plus utilisés sont

 

   1 -En rouge avec Hématoxyline – Eosine

   2- En bleu avec l’ Azan

   3 -En bleu avec le trichrome de Masson

   4 - En vert turquoise avec le trichrome de Golner

   5 - En rouge avec la coloration  de Picrofushine de Van Giesson

 

Le problème est le prix  que l’on peut  y mettre   car la coloration  4  - 5  et 6   sont disponibles chez Roth mais pas à moins de 100   euros .( les protocole sont fournis  et ne sont pas compliqués  )

 

Le plus  simple et le moins coûteux  est la coloration Hématoxyline –Eosine 

 

 Amicalement

                                       Dominique


  • 0

#4 Dominique.

Dominique.

    Invertébré

  • Membre AUTEUR
  • PipPipPip
  • 373 messages

Posté 01 décembre 2015 - 09:13

Protocole Hematoxyline- Eosine

 

Bain  dans Hématoxyline  15 minutes  .

Bain dans eau bicarbonatée PH 7,8 à 8     - 5  minutes .

La préparation prend  une teinte  violette sombre .

Rincer  eau  courant  -( pour rincer  faire couler  l’eau  doucement  du robinet   sur la face de la lame  opposée  à la  préparation   sinon  tout   est enlevé ) .

Alcool à 60°  - une goutte sur la préparation  .

Eosine alcoolique 2%     3  minutes ,  maximum .

Rincer à l’eau  courante .

 

On peut s’arrêter là  .

 Ou  faire un  montage après  déshydratation 

Alcool  60 ° - 1 minute   Alcool 100° 1 minute  - Montage à l’ Eukit .ou baume du Canada .

 

Si vous avez  du  Bleu  d’aniline . ( trichrome de Masson )

Faire suivre par  un  bain d’acide Molybdique  3 minutes .

Couvrir  une goutte  d ‘une solution de bleu d ‘ aniline   20 secondes maximum

Rincer à l’eau courante .

Rinçage avec eau ascétique à 1% .

 

Puis  déshydrater et monter  à l’ Eukit  ou au baume  du  Canada


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