Aller au contenu


***** Bienvenue dans le forum MikrOscOpia ! *****
Photo

Essai de fluorescence


  • Veuillez vous connecter pour répondre
12 réponses à ce sujet

#1 Jean-Marc Babalian

Jean-Marc Babalian

    Homo sapiens microscopicus

  • Membre confirmé
  • PipPipPipPipPipPipPipPipPipPip
  • 1 823 messages

Posté 01 décembre 2015 - 10:22

Hello,

 

Je commence des essais avec différents fluorochromes.

J'utilise entre autre de l'Acridine Orange et de la Rhodamine B, mais j'en possède d'autres.

 

La Led est une Cree MK-R J2 1769lm (12V, 1250mA), celle que j'utilisais en fond clair, DIC,CP...

 

Je ferai l'essai plus tard avec la dernière que j'ai installé en fond lair, une Cree XHP50 de 2072 lm (12,6V,1500mA)

 

Les 2 Leds sont composées de 4 chips, pour une taille de 5x5mm, ce qui est idéal pour couvrir le champ pour un objectif de 2,5x et plus.

Leur émission est importante entre 430 et 470nm.

 

J'utilise un filtre H3 qui laisse passer les ondes entre 420 et 490nm.

J'ai tenté plusieurs tests, le plus simple étant celui avec des cellules jugales traitée à la Rhodamine B :

 

cell-jug Fluo rhod 25.a.jpg

 

Cette dernière photo est réalisée en fluo en episcopie et DIC en diascopie

 

cell-jug DIC-Fluo 25.a.jpg

 

 

A+

 

JM

 

 


  • 0

#2 Jean-Marc Babalian

Jean-Marc Babalian

    Homo sapiens microscopicus

  • Membre confirmé
  • PipPipPipPipPipPipPipPipPipPip
  • 1 823 messages

Posté 01 décembre 2015 - 10:33

Ce deuxième essai est réalisé avec de l'Acridine Orange, sur divers ciliés.

La lumière de fluorescence verte est plutôt caractéristique du noyau/ADN, celle rouge, peut représenter des vacuoles ou de l'ARN :

 

Les photos sont réalisées avec avec un canon 600D, 1600 iso, et pose entre 1/30 et 1/80 (pour la fluo)

 

protoz Fluo acrid 25.a.jpg

 

protoz DIC-Fluo 25.a.jpg

 

protoz Fluo acrid 25.b.jpg

 

protoz DIC-Fluo 25.b.jpg

 

Rien de surprenant mais l'association des images peut donner des informations intéressantes.

 

A suivre...

 

JM


  • 0

#3 Tryphon T

Tryphon T

    oooOooo

  • Membre confirmé
  • PipPipPipPipPipPipPipPipPipPip
  • 13 043 messages

Posté 02 décembre 2015 - 09:53

Bonjour Jean-Marc,

 

C'est vraiment très beau tout çà !

 

Quel travail !

 

Amicalement.


  • 0

#4 Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

    Reptile

  • Membre Modérateur
  • 690 messages

Posté 02 décembre 2015 - 06:45

Bonsoir Jean-Marc,

J' aime bien la photo des cellules de la joue qui combine DIC et fluorescence. L' idée est séduisante je suis curieux de voir ce que cela donnerait avec les leucocytes par exemple.
Cordialement,
JL
  • 0

#5 pablito

pablito

    Homo sapiens microscopicus

  • Co.Admin
  • 1 245 messages

Posté 02 décembre 2015 - 07:03

Je sens qu'on va avoir plein de recherche sur la fluorescence. Magnifique
  • 0

#6 patrice duros

patrice duros

    Procaryote

  • Membre confirmé
  • Pip
  • 119 messages

Posté 03 décembre 2015 - 09:17

Hello Jean Marc,

Heureux de te retrouver ici.

Résultats prometteurs ...

J'ai tout de même une petite préférence pour les essais sur les ciliés avec l'Acridine 

J'attends la suite avec attention :).


  • 0

#7 Claude Brezisky

Claude Brezisky

    Reptile

  • Membre confirmé
  • PipPipPipPipPipPip
  • 650 messages

Posté 03 décembre 2015 - 10:25

Bonjour,

Les photos 2 et 6 associent l'éclairage oblique à la fluo et au DIC.

Essais qui sont très prometteurs.

Cordialement

Claude


  • 0

#8 Vardar

Vardar

    Ciliate lover

  • Membre Modérateur
  • 815 messages

Posté 03 décembre 2015 - 10:38

Génial !

 

Je crois que je vais brancher ma fluo: j'hésite depuis un an car elle avait fait sauter les plombs... ^^


  • 0

#9 Tryphon T

Tryphon T

    oooOooo

  • Membre confirmé
  • PipPipPipPipPipPipPipPipPipPip
  • 13 043 messages

Posté 03 décembre 2015 - 12:14

Bonjour,

 

"car elle avait fait sauter les plombs"

 

Quels plombs ? :)

 

Si ce sont ceux du compteur EDF, c'est très grave !

Tu as un sacré court-jus ! Cela ne peut pas être dû à la puissance de l'engin, mes ME y arrivent tout juste.

 

Amicalement.


  • 0

#10 sciroccoblow

sciroccoblow

    Procaryote

  • Membre confirmé
  • Pip
  • 182 messages

Posté 03 décembre 2015 - 08:40

Du moment que tu ne fais pas exploser ta lampe à vapeur de mercure...... :wacko:

 

Ton transfo de fluo envoie normalement une tension assez élevée aux bornes de la lampe.


  • 0

#11 Jean-Marc Babalian

Jean-Marc Babalian

    Homo sapiens microscopicus

  • Membre confirmé
  • PipPipPipPipPipPipPipPipPipPip
  • 1 823 messages

Posté 03 décembre 2015 - 11:09

Hello,

 

Merci à tous.

Je ne pensais jamais faire de la fluo, rebuté par les couts et les ennuis d'utiliser des lampes à vapeur de xénon ou mercure, sans compter les risques avec les UV.

Là, l'utilisation de LED puissantes est facile et peu dangereuse. On peut coupler cette technique avec du DIC, ou du CP, mais plutôt communément avec du fond noir.

J'ai pour le moment 2 problématiques :

- la prise de photo, qui évidemment ne peut pas se faire au flash interne ou externe. du coup je ne peux pas prendre les ciliés à 1/500 ou 1/1000e

- Les ciliés semblent ne pas supporter le mélange fluorochrome + lumière. Ce phénomène semble les tuer alors que l'acridine orange est un colorant vital. Les ciliés se comportent correctement lorsqu'ils ne sont pas soumis à un flux lumineux important. Vivant sous le 10x, ils meurent sous le 25 x et le 40x ! peut-être que la concentration du colorant est trop forte ?

 

Jean-Luc, les essais sur frottis sanguin avec des fluorochromes sont prévus.

Dans l'idéal, j'aimerai faire des tests avec des fluorochromes couplés avec des anticorps !  Oh Yehhh !  :D

 

A+

 

JM


  • 0

#12 Tryphon T

Tryphon T

    oooOooo

  • Membre confirmé
  • PipPipPipPipPipPipPipPipPipPip
  • 13 043 messages

Posté 04 décembre 2015 - 10:13

Bonjour Jean-Marc,tous,

 

Encore bravo pour ta persévérance !

 

- Les ciliés semblent ne pas supporter le mélange fluorochrome + lumière. Ce phénomène semble les tuer alors que l'acridine orange est un colorant vital. Les ciliés se comportent correctement lorsqu'ils ne sont pas soumis à un flux lumineux important. Vivant sous le 10x, ils meurent sous le 25 x et le 40x ! peut-être que la concentration du colorant est trop forte ?

 

 

Les Ciliés et tout être vivant, n'aiment surtout pas les UV !

Les radiations (ionisantes)  UV sont de puissants germicides , utilisées pour stériliser l'eau ou l'air et les surfaces des locaux dans les établissements de soins. 

 

Les radiations UV sont extrêmement pénétrantes et énergétiques, elles détruisent les liaisons chimiques principalement les acides nucléiques (ADN ARN), elles sont considérées comme cancérigènes. Même les matériaux comme les peintures, les plastiques, le verre, ne supportent pas. On les utilise pour simuler le vieillissement des matériaux.

 

Amicalement.


  • 0

#13 Jean-Marc Babalian

Jean-Marc Babalian

    Homo sapiens microscopicus

  • Membre confirmé
  • PipPipPipPipPipPipPipPipPipPip
  • 1 823 messages

Posté 04 décembre 2015 - 07:53

Hello,

 

Tryphon,

 

Je suis d'accord sur les UV, mais là, les LED n'en possèdent pas beaucoup, et j'ai un filtre anti UV + un cube H3 qui ne les laissent pas passer.

 

A+

 

JM


  • 0




N'oubliez pas de consulter notre Magazine en ligne ... MIK-MAG!