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Leucocytes en fluorescence


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10 réponses à ce sujet

#1 Jean-Marc Babalian

Jean-Marc Babalian

    Homo sapiens microscopicus

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Posté 06 décembre 2015 - 01:22

Bonjour,

 

L'idée est venu de Picroformol :

 

J'ai testé un peu de sang traité avec de l'Acridine Orange, fluorochrome qui réagit très bien avec une excitation dans le bleu.

Le sans est étalé en frottis sur une lame puis séché à l'air libre. Aucune coloration ou fixation n'a été réalisée.

 

Étrangement, je m'attendais à voir des noyaux renvoyant une émission dans le vert (caractéristique de l'ADN), hors je me suis retrouvé avec une émission dans le rouge (plutot caractéristique de l'ARN ou de vacuoles).

Puis après une nuit, au fur et à mesure de l'éclairage, l'émission à viré du rouge au vert :

Les hématies, ne possédant pas de noyau sont très peu visibles en fluo

 

lympho-40-fluo-06-12-15b.jpg

 

lympho-40-fluo-06-12-15c.jpg

 

J'attends vos commentaires et analyses sur ce cas !

 

Enfin, j'ai fait une observation en immersion :

L'huile synthétique d'immersion, est légèrement fluorescente, mais cela disparait quand on reste dessus. Si on bouge à un autre endroit, on voit une "phosphorescence résiduelle, qui disparait ensuite.

 

Voici une comparaisons entre de la fluorescence et une autre technique complémentaire, le contraste de phase couplé à la fluorescence. Les 2 techniques se complète très bien :

 

lympho-63-fluo-06-12-15e.jpg

 

lympho-63-fluo-CP-06-12-15e.jpg

 

Les prises de vue ne sont pas simples, (même si cela ne bouge pas  :D). On est souvent sous ou surexposé, les détails disparaissent dans les artefacts et les bruits de fonds. Il y a encore du boulot.

 

A+

 

JM


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#2 Tryphon T

Tryphon T

    oooOooo

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Posté 06 décembre 2015 - 04:11

Bonjour Jean-Marc,

 

Excellent, époustouflant ! Très belle résolution.
Pour le changement de couleur je pense que cela fait partie du processus  classique de "blanchiment".

Petit bémol, à part deux cellules qui pourraient en être, la majorité des cellules sont des Poly-neutro.
On ne peut donc pas dire que ce sont des lymphocytes, mais des leucocytes (Cellules blanches = Globules Blancs)

 

Amicalement.


  • 0

#3 Jean-Marc Babalian

Jean-Marc Babalian

    Homo sapiens microscopicus

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Posté 06 décembre 2015 - 05:49

Merci Tryphon,

 

Bien sûr, peux tu modifier le titre STP,

 

Merci

 

JM


  • 0

#4 Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

    Reptile

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  • 690 messages

Posté 06 décembre 2015 - 06:10

Bonsoir Jean-Marc,

 

Chapeau ou super ou bravo comme tu veux !

 

Je pense comme Typhon à la vue du contour des noyaux qu' il y a une majorité de polynucléaires (et peut-être un ou deux lymphocytes).

Je me suis permis de faire un mixte des deux photos fluo +CP sous The Gimp:

 

 

lympho-63.jpg

 

Pour le problème d' exposition des prises de vue il faudrait utiliser la technique HDR... quoiqu' il en soit c' est vraiment bien.

cordialement,

JL


  • 0

#5 pablito

pablito

    Homo sapiens microscopicus

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Posté 06 décembre 2015 - 07:10

impressionnant. Quelle classe, quels détails !!!

 

Pour la sur exposition, mon idée est que tes photos ne sont pas surexposées, elles sont sur-saturées. Autrement dit, comme avec mes poudres UV, trop de couleur sur le capteur (ou plutôt une couleur trop intense) et le capteur flanche ... dans son analyse et la fabrication du JPEG.

 

Donc, prend en RAW si tu peux, puis au moment de la transformation en JPEG, désature les couleurs (vert et rouge) qui sont trop intenses.

 

Bravo encore, Bonne soirée, Pierre


  • 0

#6 sciroccoblow

sciroccoblow

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Posté 06 décembre 2015 - 08:03

C'est très joli :-)

 

Pour l'huile à immersion il existe de l'huile spéciale pour la fluorescence


  • 0

#7 Jean-Marc Babalian

Jean-Marc Babalian

    Homo sapiens microscopicus

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Posté 06 décembre 2015 - 08:58

Hello,

 

Merci à tous pour vos commentaires et vos participations.

 

Belle addition, picroformol, le résultat est meilleur qu'en passant par l'accouplement des 2 éclairages épiscopique fluo et diascopique CP

Pierre, pour des images statiques, j'ai effectivement un avantage à passer en RAW.

Pour l'huile, je dispose d'une huile synthétique, je pensais qu'elle était adaptée à la fluo. Si vous avez des références d'huiles pour fluo ?

 

Merci

 

JM


  • 0

#8 patrice duros

patrice duros

    Procaryote

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Posté 07 décembre 2015 - 10:11

Hello Jean Marc,

Je réponds à la place de Fabien, qui me contredira au besoin :
Chez Leica, c'est de l'huile de type F, Référence 11513859

J'ai l'huile qu'il te faut au besoin pour des essais :)



NB : pour une goutte de sang, je trouve que tu as beaucoup de polynucléaires par champ d'observation ?


Modifié par patrice duros, 07 décembre 2015 - 10:08 .

  • 0

#9 Tryphon T

Tryphon T

    oooOooo

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Posté 07 décembre 2015 - 10:35

Pour le nombre important de GB, je pense que c'est le phénomène de rassemblement que l'on obtient en bout de frottis au moment où il s'effiloche pour former des sortes de villosités. (C'est là que je vais les chercher).

Il ne faut en tirer aucune conclusion !

La numération se fait par une autre méthode que le frottis, qui lui, donne uniquement la formule sanguine.

 

Amicalement.


  • 0

#10 patrice duros

patrice duros

    Procaryote

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Posté 07 décembre 2015 - 10:54

Oui,

d’accord certainement pour le "bout de frottis"...

Je n'ai fait qu'une constatation :)

En tout cas, tu as sans doute devancé la réponse que j'attendais de Jean Marc


Modifié par patrice duros, 07 décembre 2015 - 10:56 .

  • 0

#11 Jean-Marc Babalian

Jean-Marc Babalian

    Homo sapiens microscopicus

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Posté 07 décembre 2015 - 01:32

Hello Patrice,
Merci pour la proposition.
Et effectivement, Tryphon a vu juste
A+
JM
  • 0




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