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Inclusions dans du PEG 1000


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4 réponses à ce sujet

#1 JPL80

JPL80

    Nucléotide

  • Membre confirmé
  • 34 messages

Posté 12 février 2018 - 06:35

Bonjour

Depuis quelques temps je m'exerce à la coupe de tissus végétaux après inclusion des échantillons dans du PEG 1000.

(J'avais auparavant essayé avec du PEG 4000 mais les résultats étaient mauvais, notamment à cause de l’effritement du bloc).

Je suis étonné de la facilité d'utilisation de ce produit: coupes fines, réalisation de rubans de coupes sans difficulté (microtome Cambridge).

Toutefois un problème demeure, dont je ne trouve pas la solution. Illustration:

 

1. Une coupe de pétiole de Pélargonium que j'estime plutôt réussie:

péd géranium PEG2 X4 -3 images.jpg

 

(bain dans le Dakin 4heures - rinçage - inclusion dans PEG 1000 1 semaine en étuve - coupe au Cambridge puis simple rinçage à l'eau déminéralisée pour retirer le PEG - observation avec objectif x4 - montage de 3 photos)

 

2.Coupe de tige de Fuschia de mauvaise qualité cette fois:

Tige de fuschia.jpg

 

(bain dans de la glycérine 1 semaine pour ramollir, puis PEG comme ci-dessus - montage de 6 photos)

Le tissu est arraché en de nombreux endroits et c'est ce problème que je rencontre très fréquemment.

J'ai varié la température du bloc, l'angle de la lame, la vitesse de coupe... sans effet significatif.

 

Je remercie par avance tous les microscopistes du forum qui pourront me conseiller et m'apporter leur aide.

 

JPL80

 

 


  • 0

#2 Dominique.

Dominique.

    Poisson

  • Membre AUTEUR
  • PipPipPipPip
  • 455 messages

Posté 12 février 2018 - 10:06

Bonsoir

 

Il est probable que la  chaleur  fragilise  certaines structures,le bain de glycérine aussi   qui est réservé  aux bois durs seulement.
Mais  pourquoi ne pas faire  des coupes à main- levée – échantillon  coincé dans  le polystyrène - cela  donne souvent de  bons résultats  si la  lame de coupe  est bonne ,la technique  au PEG  étant réservée  pour les coupes   difficiles.

Et pourquoi  4 heures de Dakin    (quand 10  minutes suffisent) .

 

Amicalement 

                    Dominique .


  • 0

#3 pablito

pablito

    Homo sapiens microscopicus

  • Co.Admin
  • 1 478 messages

Posté 12 février 2018 - 11:52

Oui, Domique a raison
Trop longtemps dans le dakin fragilise les tissus et devient néfaste . Par contre si tu veux colorer, pense bien après le dakin à faire rinçage ET petit passage au vinaigre blanc

Pierre
PS

J’aime beaucoup ta coupe de pélargonium !

Pierre
  • 0

#4 JPL80

JPL80

    Nucléotide

  • Membre confirmé
  • 34 messages

Posté 13 février 2018 - 05:10

Merci à vous Dominique et Pierre.

La coupe de Pélargonium est l'une des rares  qui ont été réussies parmi un grand nombre de coupes déchirées comme pour l'autre exemple.

Sans doute donc à cause d'un bain trop long dans le Dakin, que j'avais cependant jugé nécessaire compte tenu de l'épaisseur de l'échantillon. Je recommencerai avec d'autres pièces et une durée de bain bien inférieure.

Quant au fuschia, je l'ai mis dans de la glycérine car il s'agissait d'un échantillon bien aoûté provenant d'un pied resté dehors tout l'hiver. Les premières coupes, avant ce bain, étaient quasi impossibles.

Ne pensez-vous pas que les déchirures peuvent également être dues à la lame? Il s'agit d'une lame fournie avec le microtome Cambridge, en fort bon état apparemment, mais peut-être de médiocre qualité:

20180213_155914.jpg

 

JPL80


Modifié par JPL80, 13 février 2018 - 05:12 .

  • 0

#5 Dominique.

Dominique.

    Poisson

  • Membre AUTEUR
  • PipPipPipPip
  • 455 messages

Posté 14 février 2018 - 12:49

Bonsoir

 

Les altérations  de tes coupes  sont  trop diffuses  pour  être créées  par ta lame.

Ce type de lame  nécessite cependant  qu’elles soient   aiguisées  régulièrement   ( comme  pour les  barbiers) avec  un cuir .

Les lames de microtome  à usage unique  donnent le meilleur des résultats  - sans danger avec l’appareil de Klaus

http://forum.mikrosc...tome#entry67845

Amicalement

                            Dominique


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