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Globules rouges et étalonnage


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14 réponses à ce sujet

#1 Robert Rivière

Robert Rivière

    Robert RIVIERE

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Posté 16 janvier 2005 - 12:02

Bonjour a tous,

Ayant en ma possession une belle plaquette avec un frottis sanguin humain et me disais dans ma petite tête ;) « Tiens ! Pourquoi ne pas me servir du diamètre d’une hématie pour étalonner mes prise de vue webcam et APN en X40 et X100? »
Je pense que c’est une bonne idée, mais je me pause et vous pause aussi la question :
Un globule rouge humain a-t-il toujours un diamètre de 7,5 microns car sertains ont une forme assez irrégulière non?

Amicalement,

Robert


P.S. voila l'image en X40 taille de l'image 640x480 zoom de mon APN a fond ;)

Miniature(s) jointe(s)

  • DSCN0001.JPG

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#2 Olivier Messmer

Olivier Messmer

    Homo sapiens microscopicus

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Posté 16 janvier 2005 - 12:15

Hello Robert !

Excellente question !
Il suffit d'aller dans un labo d'analyses médicales, leur demander de te prélever et leur demander de te rendre quelques lames colorées au MGG, et les résultats de ton VGM (Volume moyenne globulaire) et de regarder au microscope avec plusieurs objectifs ! Voilà un très bon moyen de comparaison ...

Excellente idée, proposition !!!

--------------------------------------------=o :P o=---------------------------------------
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#3 Michel

Michel

    Homo sapiens microscopicus

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Posté 16 janvier 2005 - 04:03

Bonjour le Forum, Robert et Olivier,



….une belle plaquette avec un frottis sanguin humain et me disais dans ma petite tête ;) « Tiens ! Pourquoi ne pas me servir du diamètre d’une hématie pour étalonner mes prise de vue webcam et APN en X40 et X100? »

Je pense que c’est une bonne idée, mais je me pause et vous pause aussi  la question :
Un globule rouge humain a-t-il toujours un diamètre de 7,5 microns car sertains ont une forme assez irrégulière non?)


Cette question a été débattue à plusieurs reprises sur la a liste.
Tout est relatif !
Cette méthode peut donner en effet un ordre (ou un demi ordre) de grandeur afin d’évaluer approximativement la taille d’un objet microscopique que l’on ne connaît pas, mais certainement pas un moyen d’étalonnage !

La valeur « encyclopédique » de 7.5 µ pour un GR est une valeur moyenne, statistique, théorique et ne peut pas servir de mesure. En effet un GR étalé sur une lame, peut être considéré comme une méduse sur la plage. Les GR sont des structures assez molles qui vont prendre des formes pas du tout calibrées de plus leur taille peut subir des variations pathologiques ou physiologiques.
En pathologie on rencontre des anomalies de taille et de forme. On considère comme normales des hématies étalées d’une taille de 7 à 7.8µ (Normocytes). Quand on s’éloigne de ces valeurs on a des Macrocytes et des Mégalocytes dans un sens ou des Microcytes dans l’autre. Mais les anomalies dimensionnelles peuvent toucher aussi la forme : Shérocytose Ovalocytose Drépanocytose et je m’arrête là…
La taille dépend également des conditions de prélèvement de conservation et d’étalement par variation de la pression osmotique.

Une belle « plaquette », pas tant que cela. Ta photo est très jolie, mais ne colore que les hématies en rouge pour leur donner la couleur que l’on s’attend à trouver, mais ne laisse aucune possibilité de différencier les Globules Blancs.
La coloration des frottis sanguins universellement utilisée dans les LAM est la coloration au MGG, dans laquelle les GR ne brillent pas par leur couleur car ils n’ont rien à nous montrer mais permet de caractériser les populations leucocytaires. Une description de la technique et des résultats attendus se trouve sur le site (PRATIQUE-TPM-2)

Autre remarque : tout microscopiste devrait avoir au moins une fois eu la curiosité de regarder son propre sang vivant (a vos contraste de phase !) ou coloré. Certaines techniques de coloration poly chromatiques ne sont pas plus compliquées que celle des coupes végétales !

Cordialement.
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#4 Olivier Messmer

Olivier Messmer

    Homo sapiens microscopicus

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Posté 16 janvier 2005 - 04:17

Re !

Alors, une idée gicle en moi !
Dans mon labo, nous utilisons pour calibrer les cytomètres de flux, des microbilles de latex sur lesquelles sont fixées des anticorps marquées aux différentes fluorochromes, ces microbilles en polymethylmethacrylate sont calibrées à 6 µm.
Je pourrais éventuellement pouvoir m'en servir pour étalonner mes objectifs.
Je vais vous chercher d'autres composantes plus faciles à trouver dans le commerce pour étalonner vos objectifs, sinon d'utiliser la tranche d'une lamelle couvre objet (0.17).
-------------------------------------------=o ;) o=----------------------------------------
  • 0

#5 Robert Rivière

Robert Rivière

    Robert RIVIERE

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Posté 16 janvier 2005 - 04:29

Bonjour Michel et Olivier,

Très intéressant tout cela, et je me disais aussi, Michel, que cela était trop facile :)
Par contre Olivier, si effectivement tu utilises des microbilles bien calibrées a ce moment la, cela peut être très intéressant pou toi.
Je connais l’astuce de la mesure avec les lamelles couvre objet, mais je me demandais simplement s’il n’y avait pas un moyen plus simple en trouvant « quelque chose de petit », de « régulier au niveau taille » et de « facile a trouver » :)
Je continu a chercher aussi de mon coté !

Amicalement,

Robert

Modifié par robertriviere, 16 janvier 2005 - 04:30 .

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#6 Michel

Michel

    Homo sapiens microscopicus

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Posté 16 janvier 2005 - 05:26

Re :

Pour les microbilles calibrées, cela pourrait être une méthode intéressante si ce n’était son prix !
Par exemple un flacon d’une solution (10 ml à 1%) de Dynosphères de 20 µ (Ce qui serait un bon compromis, mais il y a d’autres dimensions !) coûtent quand même 1900 Francs. Cela représente quand même pas mal de sphères !
Si un matheux voulait bien nous calculer le nombre de lames que l’on pourrait élaborer avec un flacon ?
Cordialement.
  • 0

#7 Dominique Prades

Dominique Prades

    Modérateur Animateur

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Posté 16 janvier 2005 - 05:33

Bonjour à tous,

Concernant l'étalonnage des objectifs,à l'aide de lamelles et celle plus rigoureuse de la lame micrométrique,je peux vous dire que j'ai eu des résultats assez proches.

Je donnerai les chiffres trouvés sur le Forum adéquat.

Bonne journée
  • 0

#8 Olivier Messmer

Olivier Messmer

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Posté 16 janvier 2005 - 10:11

Re !
Hello Michel Ier !

Par exemple un flacon d’une solution (10 ml à 1%) de Dynosphères de 20 µ (Ce qui serait un bon compromis, mais il y a d’autres dimensions !) coûtent quand même 1900 Francs. Cela représente quand même pas mal de sphères !
Si un matheux voulait bien nous calculer le nombre de lames que l’on pourrait élaborer avec un flacon ?


Alors, là, il se trouve que j'ai un lot dont la date de péremption est dépassée depuis 2002, et donc trois flacons, avec ces microbilles !
Je vais étudier donc la possibilité de préparer des lames avec lamelles lutées bien sûr, montées sous Entellan que je possède. Si tout cela est faisable, je me ferais le plaisir d'envoyer une lame à ceux qui en feraient la demande !

@ plus ! ---------------------------------=o ;) o=-----------------------------------------
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#9 Olivier Messmer

Olivier Messmer

    Homo sapiens microscopicus

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Posté 17 janvier 2005 - 11:29

Bonjour le Forum,

Alors, là, j'ai encore mieux ! des microbilles de latex stabilisées de 10µm, provenant d'un ancien flacon de calibration pour un compteur de plaquettes.
J'ai 15ml de liquide, j'en ai profité pour voir avec un microscope du labo, pour voir que ces microbilles sont parfaitement visibles, et très sphèriques .
J'en ai très largement de quoi en faire des lames ! à raison d'UN µl par lame ... y'en aura pour tout le monde ...
@ bientôt ...---------------------------------=o ;) o=-------------------------------------
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#10 Michel

Michel

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Posté 17 janvier 2005 - 12:16

Bonjour Olivier,

C'est magnifique!
Mais il me semble que 10µ c'est un peu petit pour la plupart des observateurs, par contre pour les objectifs forts cela ne devrait pas poser de problème.
Reste à trouver un medium adequat.

Cordialement.
  • 0

#11 Olivier Messmer

Olivier Messmer

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Posté 03 février 2005 - 08:09

Re !

Je viens de récupérer une vieille cellule de comptage Neubauer !
Comme les cotes sont connues, l'étalonnage de mes objectifs / webcam n'en sera plus que facile !

Photo 1 : la cellule elle même !
Photo 2 : les cotes !

@ plus ! ------------------------------------=o ;) =o--------------------------------------------

Miniature(s) jointe(s)

  • neub.JPG

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#12 Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

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Posté 06 mars 2005 - 04:19

Bonjour olivier,
Bonjour le Forum,

Pour continuer dans ton idéee je peux fournir des microparticules de 3 µm (diamètre estimé avec un micromètre objectif). Voir photos jointes avec objectif x8 et x45. Je peux avoir d'assez grande quantité de particules mais il faudrait faire des mesures précises du diamètre de celles ci.
Cordialement,
JL

Miniature(s) jointe(s)

  • Billes_2_Forum8.jpg

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#13 Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

    Reptile

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Posté 06 mars 2005 - 04:20

Photo micromètre obj x8

JL

Miniature(s) jointe(s)

  • Micrometre8Forum.jpg

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#14 Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

    Reptile

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Posté 06 mars 2005 - 04:21

Photo particules obj x45
JL

Miniature(s) jointe(s)

  • Billes_2_Forum45.jpg

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#15 Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

    Reptile

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Posté 06 mars 2005 - 04:23

la dernière
photo micromètre objectif x45
JL

Miniature(s) jointe(s)

  • Micrometre_2_Forum45.jpg

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