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RALENTIR LES CILIES CMC

CMC

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23 réponses à ce sujet

#1 Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

    Homo sapiens microscopicus

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Posté 10 mars 2016 - 03:19

Bonjour,

 

       Lorsque l' on observe des ciliés à l' état frais, du fait de leur vélocité, on a du mal à observer leurs détails, les photos sont souvent floues (sauf avec un flash) et les vidéos doivent-être faites idéalement à 60 images/seconde pour un bon rendu sinon il faut passer par la fixation, coloration.

       Pour ma part avec la caméra dédiée au microscope (avec la pleine résolution)l' acquisition se fait à environ 3 images/sec. donc impossible d' avoir une vidéo exploitable.

       Il y a quelques temps j' ai trouvé cet article sur l' internet:

 

https://www.mccrone....quatic-animals/

 

    Parmi les méthodes évoquées j' ai remarqué l' utilisation de la carboxymethylcellulose (CMC) dérivé de la cellulose que j' ai trouvé dans un magasin d' article pour pâtisserie en tant que colle alimentaire:

 

71Ujx0X4GNL._SL1500_.jpg

 

J' en ai fait une solution à 10% dans de l' eau minérale (on obtient un gel à cette concentration). Pour l' utilisation je dépose une goutte du prélèvement à examiner sur la lame puis, à l' aide d' une aiguille montée je prélève dans le flacon une petite "boule" de gel que je mélange progressivement sur la lame et  je dépose la lamelle couvre objet;

voici deux photos de ciliés obtenues dans ces conditions (les sujets ne sont pas immobilisés mais ralentis):

 

 

cilie_1_bak.jpg

 

cilie_bak.jpg

 

Sur la deuxième photo on voit bien à droite du cilié des "cils" importants comme une voilure que je n' avais jamais observé auparavant; Je pense que la CMC en modifiant l' indice de réfraction améliore le contraste;

Enfin une petite vidéo avec l' objectif x60 prise avec la caméra à 3 images/sec, à 9sec du début il y a un arrêt sur image montrant une structure du cilié:

 

 

Si il y en a parmi vous souhaite expérimenter la CMC votre retour d' expérience serait le bienvenu. Je vais essayer de faire d' autres vidéos avec un appareil numérique .

Cordialement,

JL

 


  • 0

#2 Vardar

Vardar

    Ciliate lover

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Posté 10 mars 2016 - 03:44

Sujet intéressant.

La video n'est pas publique.


  • 0

#3 Daniel Crabbé

Daniel Crabbé

    Eucaryote

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Posté 10 mars 2016 - 03:57

Que faisaient les ciliés ? YouTube a censuré  :D


  • 0

#4 Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

    Homo sapiens microscopicus

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Posté 11 mars 2016 - 08:10

Voici le lien pour la vidéo publique:

 

https://youtu.be/Dp6Uu3xviag

 


  • 0

#5 Buteo

Buteo

    Anthropoïde

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  • 824 messages

Posté 11 mars 2016 - 08:34

Bonjour Jean-Luc,

ton sujet m'a rappelé que le ralentissement de nos bestioles avait déjà été abordé dans MikrOscOpia. Je viens de faire le tour dans nos sujets sans le retrouver mais j'avais fait une copie du texte que je remets ci-dessous.

Que l'auteur du sujet veuille bien m'excuser de n'avoir pu remettre la main sur le sujet et proposer, en conséquence, un lien direct.

 

Texte :

 

Les protozoaires sont des animaux fascinants à observer, tout autant que rebutants , car souvent leur vitesse de déplacement gêne considérablement l’observation à fort grossissement.

Je vous livre deux petits trucs que j’ai utilisés pour pouvoir filmer les infusoires avec une caméra à 24 images/seconde dans le film « phénomènes d’autoépuration dans les eaux ». J’ai pu aussi ainsi observer l’endocytose (ingestion de particules alimentaires ou non).


Observations des protozoaires à l’état vivant

Matériel :

-suspension abondante d’infusoires (Paramecium, Tetrahymena, Colpidium, Colpoda, Hypotriches, Péritriches, etc…) ou de tout autre protozoaire très mobile.
- graines de Plantain (de préférence Plantago ovata, plantain des indes ou Psyllium).
- tubes à hémolyse ou petits tubes quelconques.
- pipette Pasteur ou équivalente.


Manipulations

1) Disposer dans trois ou quatre tubes une petite quantité de graines de plantain (1 volume).

2) Ajouter dans chaque tube respectivement, un volume, deux volumes, trois volumes de suspension d’infusoires

3) Laisser reposer. Le mucilage du plantain absorbe l’eau de la culture et gonfle progressivement, rendant le milieu de plus en plus visqueux, d’autant plus visqueux qu’il y a moins de liquide par volume de graine.

4) Avec le tube 1/1 (volume/volume) on peut faire les observations assez vite, dès que les graines semblent avoir absorbé le liquide. Pour faire les meilleures observations, il est préférable d’attendre que le contenu des autres tubes s’épaississe, car les protozoaires s’accoutument mieux et leur comportement est moins perturbé.

5) Prélever à la pipette une goutte (parfois très visqueuse) de la préparation. La déposer sur une lame. Recouvrir d’une lamelle. Observer au microscope.

Dans ces conditions, le mouvement des infusoires est considérablement ralenti et on peut observer les animaux vivants avec un objectif à immersion sans problème….

La technique présente des avantages par rapport à la carboxyméthylcellulose (Methocel et autres) et à la gomme arabique.

- Elle n’est absolument pas toxique pour les infusoires qui continuent à se déplacer et s’alimenter normalement. On peut même observer des divisions.

- On peut conserver les cultures épaissies plusieurs jours sans autre inconvénient que celui de la prolifération de grosses bactéries spontanément présentes à la surface des graines, qui ne gênent pas l’observation. Elles donnent des sujets d’étude complémentaires par leur mobilité.

- Contrairement à la carboxyméthyl cellulose et à la gomme arabique qui donnent un voile laiteux en contraste interférentiel Normarski, le gel de plantain est absolument transparent et cristallin et permet les observations avec des techniques comme le contraste de phase ou le contraste interférentiel.

Observation de l’endocytose chez les infusoires

Matériel

- Tubes hémolyse ou équivalent
- Une suspension abondante d’infusoires
- Eau distillée
- encre de chine (de préférence en tube avec poussoir caoutchouc)

Manipulation

1) Diluer une goutte d’encre de chine dans 5ml d’eau

2) Ajouter un volume de la dilution à un volume de suspension d’infusoires (pour faire 1 à 2 ml au total). C’est le temps zéro de l’expérience.

3) Aux temps 5, 10 et 15 mn, prélever quelques gouttes de la préparation, la fixer et observer entre lame et lamelle.

4) Après 15 mn Prendre une partie de la préparation et l’épaissir avec des graines de psyllium (1/1 ou ½ V/V)

5) Garder les préparations normale et épaissie à température ordinaire.

Observations

Les ciliés endocytent les particules noires de l’encre de chine et forment des vacuoles digestives qui apparaissent en noir sur le fond clair de la cellule. En travaillant à différents temps, on peut compter le nombre de boules noires dans les individus et comparer, par exemple, le temps de formation d’une vacuole chez la paramécie, la vorticelle ou Tetrahymena, par exemple. On peut montrer aussi que sur les quinze premières minutes, en général, la vitesse d’endocytose est constante.

Sur les préparations épaissies au psyllium, on peut passer à l’immersion et observer la formation de la vacuole digestive au fond de l’entonnoir buccal, au niveau du cytopharynx. On voit une accumulation progressive de particules noires et on peu aisément observer le détachement et l’individualisation de la vacuole digestive.

Si on garde les cultures suffisamment de temps et si la population de ciliés est abondante, on pourra observer l’éclaicissement du milieu qui indique que les particules d’encre de Chine ont été ingérées. Les infusoires sont alors littéralement bourrés de vacuoles noires.

Remarque :

L’encre de Chine peut être remplacée par des bactéries colorées. Je n’ai jamais essayé le bleu de méthylène qui peut diffuser, mais j’ai coloré des cultures bactériennes avec du chlorure de triméthyl tétrazolium qui est réduit par les bactéries en formazan rouge insoluble. Ce sont de telles bactéries qui ont été utilisées dans le film « phénomènes d’autoépuration dans les eaux ». Cela explique que les vacuoles des Colpidium et des paramécies sont colorées en rouge. Les graines de Psyllium m’ont permis de réaliser les prises de vue à l’immersion sans problème, les animaux étant considérablement ralentis, mais gardant un comportement normal pendant plusieurs jours.

 

Je reprends la main pour dire que j'attends que les plantains pointent leur nez et nous fournissent des graines pour pouvoir essayer cette méthode.

 

Buteo


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#6 Tryphon T

Tryphon T

    oooOooo

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Posté 11 mars 2016 - 09:48

Bonjour, 

 

Excellent tout çà !

 

Première remarque, La solution (ou le gel plutôt) de CMC ne va pas se conserver longtemps à cause de la prolifération bactérienne.

Il faudrait lui ajouter un antibactérien ce qui ne sera pas neutre pour les ciliés.

Il vaut mieux préparer une solution de volume plus faible et plus souvent.

Comme les quantités de CMC seront plus faible, il suffit de peser la poudre avec une balance de poche .

 

 

 

Bal.jpg  BA2.JPG

Cliquer pour commander  :)

 

Pour le texte voici le lien

 

Comment observer facilement des protozoaires très mobiles ( Daniel Dive)

 

Pour la vidéo :

 

 

Amicalement.

 

 

 


  • 0

#7 Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

    Homo sapiens microscopicus

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Posté 11 mars 2016 - 11:42

Bonjour Butéo,

 

J' avais essayé la graine de plantain l' année dernière mais sans succès ?

Pour la conservation au bout d' un mois en flacon fermé je n' ai pas observé de prolifération microbienne ou fongique.

Cordialement,

JL


  • 0

#8 Tryphon T

Tryphon T

    oooOooo

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Posté 11 mars 2016 - 01:10

Patience !


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#9 Vardar

Vardar

    Ciliate lover

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Posté 11 mars 2016 - 01:49

Daniel Dive a été l'un de mes maîtres en protistologie

Il m'a reçu à de nombreuses dans son laboratoire d'Ecotoxicologie de Villeneuve d'Ascq où il étudiait Colpidium campylum

J'avais 15 ans...


  • 0

#10 BourrinOman

BourrinOman

    Invertébré

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Posté 14 décembre 2019 - 10:16

Bonjour.

 

Cette technique pourrait m’intéresser (j'ai beaucoup de mal à photographier les ciliés très vifs.

 

J'ai quelques questions concernant le sujet cité par Reptile :

 

 

Matériel :

-suspension abondante d’infusoires (Paramecium, Tetrahymena, Colpidium, Colpoda, Hypotriches, Péritriches, etc…) ou de tout autre protozoaire très mobile.
- graines de Plantain (de préférence Plantago ovata, plantain des indes ou Psyllium).
- tubes à hémolyse ou petits tubes quelconques.
- pipette Pasteur ou équivalente.

 

Est-ce-qu'un bocal quelconque peut faire l'affaire ?

 

Est-ce-qu'avec les graines de plantain que l'on trouve à l'était sauvage, ça marche également ?

 

 

1) Disposer dans trois ou quatre tubes une petite quantité de graines de plantain (1 volume)

 

A quoi correspond 1 volume de graine de plantain (je ne calcule quasiment jamais en volume)

 

 

2) Ajouter dans chaque tube respectivement, un volume, deux volumes, trois volumes de suspension d’infusoires

 

 

Même question :) .

 

 

Avec le tube 1/1 (volume/volume) on peut faire les observations assez vite, dès que les graines semblent avoir absorbé le liquide.

 

Quels sont les indices indiquant que les graines font effet ?

 

 

Pour faire les meilleures observations, il est préférable d’attendre que le contenu des autres tubes s’épaississe

 

Auriez-vous une idée du délai idéal ?


  • 0

#11 BeCurious

BeCurious

    Acide nucléique

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Posté 19 décembre 2019 - 02:55

Bonjour,

Pourquoi ne pas essayer avec du gel échographique ou du gel stérile type K-Y ? 
 


  • 0

#12 Tryphon T

Tryphon T

    oooOooo

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Posté 19 décembre 2019 - 08:50

Bonjour, 

Je viens de faire le tour dans nos sujets sans le retrouver 

Oui jean-Luc, le sujet a été déjà traité , voici un résultat de recherche avec carboxyméthylcellulose 

 

http://forum.mikrosc...h&fromMainBar=1

 

Le gel pour ultrasons, n'est pas adapté à la microscopie, sa composition est trop diverse selon les marques et contient de nombreux agents dont je doute qu'ils soient appréciés par nos chers protistes.

Déjà à l'odeur et aux résidus, on peut en douter

 

Voici une composition :

Eau, triethanolamine, carboner, glycole propylène, methychloroisothiazoline, methylisoth iazoline, essence de parfum d'alcool, C142090

 

Et un autre :

 Polymère, substance humidifiante et eau d'osmose inverse. Conservateur: Parahydroxybenzoates propylique et méthylique en concentration bactériostatique.

 

On peut toujours essayer !

 

Amicalement.


  • 0

#13 Dudulle

Dudulle

    Acide nucléique

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Posté 23 décembre 2019 - 01:08

Bonjour

 

Je viens d'essayer cette méthode qui fonctionne très bien. J'ai pas exemple pu observer des micro organismes qui utilisent 2 longs fouets pour se déplacer, fouets que je n'avais pas pu voir jusque là.

Par contre la viscosité du mélange fait que la lamelle couvre-objet met un temps fou à descendre, ce qui produit un courant important qui empêche d'utiliser un grossissement important. Est-ce qu'il y a une technique pour stabiliser le liquide plus rapidement ?


  • 0

#14 Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

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Posté 23 décembre 2019 - 05:56

De quelle méthode parles-tu le plantain ou la CMC ?
  • 0

#15 Dudulle

Dudulle

    Acide nucléique

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Posté 23 décembre 2019 - 07:40

De la méthode au CMC : J'ai préparé une solution mère concentrée, je dépose une goutte à observer sur la lame, j'ajoute une petite boule de gel avec une spatule, et je triture le tout pour le rendre homogène.

Lorsque je pose la lamelle le liquide a beaucoup de mal à se répartir, et j'observe un courant de liquide important.


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#16 Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

Jean-Luc Bethmont (Picroformol)

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Posté 23 décembre 2019 - 07:46

Peut-être que ta solution mère est trop concentrée tu peux la diluer au 1/2 par exemple et ajouter un poids sur ta lamelle (genre écrou) pour faciliter l' applatissement
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#17 Dudulle

Dudulle

    Acide nucléique

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Posté 23 décembre 2019 - 08:05

J'essayerai cette méthode, merci.


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#18 chrisdevasles

chrisdevasles

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Posté 28 mai 2020 - 01:55

Bonjour

je relis vos écrits n'ayant pas encore adopté la technique  ,  et attend que le plantain pointe le bout de ses tiges 

c'est bientot lheure, 

 

j'ai l'intention de me servir de palntain sauvage on en trouve plein le long des champs , mais 

question conservation des graines, ? 

seront elles encore actives cet hiver , si j'en conserve dans une petite bouteille, en eau , ou a sec ? 

 

qui a expérimenté sur une saison ? 

 

Merci , 

a vous relire 

CB  


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#19 Tryphon T

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Posté 28 mai 2020 - 02:36

Bonjour,

 

Je pense que l' Agar-Agar est bien plus pratique !

(En plus tu peux faire des flans !)

Avec les graines, il faudra filtrer.

 

Pour les graines, leur action se conservent même si elles ne germent plus au bout de plusieurs années , mais le liquide préparé à l'avance ne se conserve pas, c'est même un bouillon de culture, il va se corrompre...

 

Amicalement.


  • 0

#20 chrisdevasles

chrisdevasles

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Posté 28 mai 2020 - 03:50

OK Tryphon, y en a a la cuisine ,  

je n'avais pas lu qu il fallait filtrer le plantain , on passe parfois a coté de choses tellement évidentes, 

 je reste néophyte , mais passionné , c'est important

 

je vais de ce pas soudoyer ma belle,   en cuisine, 

 

Merci @bientot

 

CB


  • 0

#21 chrisdevasles

chrisdevasles

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Posté 31 août 2020 - 06:01

bonsoir 

j ai essayé agar agar 

avec l eau tiede ça fait des boules, 

dans l eau froide il ne se produit rien 

je n'arrive pas a produire l'intermédiaire 

au départ j' utilise des paillettes que j arrive a broyer,mais je n'arrive pas a en faire un liquide visqueux

 

bref, je suis pas tres bon en cuisine non plus , 

 

je dois essayer le plantain, , j espere que ça se conserve,

 

votre avis ?

 

CDV interessé

 

 

 


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#22 BourrinOman

BourrinOman

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Posté 04 décembre 2020 - 07:49

Bonjour.

 

Je remonte je sujet pour une question.

 

Est-ce-que de la pommade (ou autre produits similaires) peuvent faire l'affaire pour ralentir les ciliés ?


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#23 Jean-Marc Babalian

Jean-Marc Babalian

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Posté 04 décembre 2020 - 08:12

L'alcool à 90° est top pour les stopper !

 

La majorité des produits épaississants rétenteurs d'eau comme les CMC, agar,  ... doivent être mélanger en très petite quantité, généralement il faut amener beaucoup d’énergie et de temps pour faire un mélange sans grumeaux, et le mieux c'est en chauffant (process en cosmetique et pharmaceutique). Parfois il faut modifier le ph pour changer la viscosité, faciliter le mélange, avant de remettre un ph neutre.

Ensuite, changer le milieu des ciliés, donc peut-être la pression osmotique, pourrait entraîner une déformation de son enveloppe.

 

JM


Modifié par Jean-Marc Babalian, 04 décembre 2020 - 08:14 .

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#24 BourrinOman

BourrinOman

    Invertébré

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Posté 04 décembre 2020 - 08:54

OK, je suppose que tout ce processus n'est pas nécessaire avec de l'alcool à 90° ?


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