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Colorations trichromes utilisées en histologie animale


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1 réponse à ce sujet

#1 Dominique.

Dominique.

    Batracien

  • Membre AUTEUR
  • PipPipPipPipPip
  • 554 messages

Posté il y a une semaine

 

 

Les colorations  trichromes utilisées en  histologie animale

 

 (Il existe  pour chacune  des techniques des  kits qui contiennent  tous  les produits) .

Le travail peut se faire sur lame    - mais dans ce cas il y a  toujours le problème de la déshydratation naturelle  ( faire une chambre humide en retournant  un verre de montre  sur la lame ) ou  utiliser  les  Tubes  de Borel  ce que je fais  mais   cela  nécessite  de posséder plus de produits  et d’ avoir   une batterie d’au moins 6 tubes. .

Pour garder les produits  dans les tubes de Borel qui ne sont pas  étanche    mettre entre  le sommet du tube et le couvercle  2 à 3 couches de petits carrés  de  gant à usage unique  -  c’est parfait ) .

La durée d’action des colorants  est très  variable  suivant les labos – je ne donne que selon mon expérience  -

 

 Trichrome de Masson  (temps de préparation 25 minutes)

Après  déparaffinage.

Hydratation sous le  robinet quelques secondes  ( toujours côté  lame sans échantillon  et  éponger  les lames   après les opérations de la lavage à l’ eau – ou laisser égoutter ).

Hématoxyline de Mayer    10 Minutes.

Bain dans eau Bicarbonatée PH 7,8 à 8    3 minutes.

Rincer à l’eau  courante.

Alcool à 60° simple passage.

Eosine alcoolique 2%    3 minutes.

Rincer à l’eau courante.

Rinçage dans eau acétique à 2%  (5 allers /retours   suffisent)     dans 2 bains  différents.

Bain  avec Acide phosphomolybdique  3 minutes.

Egoutter  la lame  sans laver  ni essuyer.

Bleu d’aniline   (le pouvoir  colorant étant  intense   il faut faire une dilution au ¼ avec de l’eau  du produit vendu)   20 à 40 secondes maximum.

Rincer à l’eau courante.

Passage dans eau acétique à 2%    (5 allers/retours).

Déshydratation  Alcool à 60°   ( grande  surveillance car l’ alcool enlève l’ éosine ) puis  alcool  absolu  ( le colorant ne bouge plus )  - surveillance de  l’ état de différentiation  sous bino).

Bain Xylène.

Résultats

Noyaux  bleu

Cytoplasme   rose

Tissus conjonctif bleu

 

Montage  Eukit .

( A noter que le Labo Diapath propose un Trichorme  de Masson  qui commence  comme le Trichrome de Goldner  mais dans  sa troisième partie  remplace   le vert lumière de Goldner  par de l’ aniline  ) .

 

Trichrome de  Masson  selon Goldner

Déparaffiner    et hydrater les coupes  par un passage de quelques  secondes  sous  eau.

Ici le travail se fait sur lame  dans une chambre humide  (verre de montre  retourné).

Recouvrir de 5 gtt  d’ Hématoxyline ferrique  selon Weigert réactif A ajouter 5 gtt du réactif B (réaction  immédiate  le produit devient noir) laisser agir 10 minutes.

Bleuissement  à l’ eau  courante  pendant au moins 5 minutes  ( l’ eau du  robinet  coule doucement sur le côté :  lame sans  échantillon ).

Laisser égoutter la lame puis

Recouvrir les coupes d’acide picrique solution alcoolique saturée pendant 5 minutes  (évaporation rapide  donc  intérêt  du tube de Borel) .

Laver à l’eau   30 secondes.

Fuchsine Ponceau  selon Masson 4 minutes.

Égoutter la coupe.   (si trop rouge on peut passer la lame sous l’eau )  (Contrôler sous bino).

Recouvrir les coupes avec acide phosphomolybdique  (on peut travailler sur  lame) pendant 4 minutes.

Égoutter la lame et surtout ne pas laver.

Recouvrir les coupes de Vert lumière selon Goldner  pendant 2 minutes.

Déshydratation  Alcool à 60°   ( grande  surveillance car l’ alcool enlève le vert lumière  ) puis  alcool  absolu  ( le colorant ne bouge plus )  - surveillance de  l’état de différentiation  sous bino).

Bains Xylène.

Montage  Eukit.

Résultats

Noyaux  bleu

Cytoplasme   rose

Tissus conjonctif  vert

 

Trichrome de Masson  selon Gill II

Déparaffiner    et hydrater les coupes  par un passage de quelques  secondes  sous  eau.

Le mieux est de travailler avec  des tubes de Borel

Recouvrir les coupes  avec //ou bain dans’ Hematoxyline de Gill II   pendant 5 minutes

Laver à l’ eau  courante  pendant au moins 5 minutes  ( l’ eau du  robinet  coule doucement sur le côté : lame sans  échantillon ).

Recouvrir les coupes d’acide picrique solution alcoolique saturée pendant 5 minutes  ( Pb :évaporation rapide  donc  intérêt  du tube de Borel).

Laver à l’eau   30 secondes.

Fuchsine Ponceau  selon Masson 4 minutes. (On peut aussi  utiliser l’Eosine alcoolique à 2%).

Egoutter la coupe.   (si trop rouge on peut passer la lame sous l’eau)  (Contrôler sous bino).

Recouvrir les coupes avec acide phosphomolybdique  (on peut travailler sur  lame) pendant 4 minutes.

Egoutter  la lame  sans laver  ni essuyer.

Bleu d’aniline   (le pouvoir  colorant étant  intense   il faut faire une dilution au ¼ avec de l’eau  du produit vendu)   20 à 40 secondes maximum.

Rincer à l’eau courante.

Déshydratation  Alcool à 60°   ( grande  surveillance car l’ alcool enlève le rouge ) puis  alcool  absolu  ( le colorant ne bouge plus )  - surveillance de  ‘l etat de différentiation  sous bino).

Bains Xylène.

Montage  Eukit.

Résultats.

Noyaux  bleu.

Cytoplasme   rose.

Tissus conjonctif bleu.

 

Trichrome de Gomori (intérêt surtout  pour l’étude des tissus musculaires ).

Travailler  sur lame.

Déparaffiner    et hydrater les coupes  par un passage de quelques  secondes  sous  eau.

Hématoxyline de Mayer    10 Minutes.

Bain dans eau Bicarbonatée PH 7,8 à 8    3 minutes.

Ou

Hématoxyline de Mayer  45 secondes .

Passage sous l’eau  du robinet 3 à 5 minutes  pour le bleuissement.

 

Rincer à l’eau  courante.

Couvrir la lame avec Colorant de Gomori   pendant 10 minutes.

Laver à l’eau déminéralisée.

Acide chlorhydrique 50% pendant 15 secondes  (maximum) .

Égoutter la  lame.  

Couvrir avec le Buffer Gomori  pendant 20 secondes.

Laver  avec  l’eau déminéralisée

Déshydratation  Alcool à 60°   rapide  puis  alcool  absolu  (surveillance de l’état de différentiation  sous bino).

Bains Xylène.

Montage  Eukit .

Résultats

Myofibrille vert.

Matériel  inter myofibrillaire  rouge.

Tissus conjonctif vert brillant.

Noyaux bleu.

 

Le plus utilisé est le trichrome de Masson

 

                  Dominique.


Modifié par Dominique., il y a une semaine.

  • 0

#2 scrophulaire

scrophulaire

    Eucaryote

  • Membre confirmé
  • PipPip
  • 207 messages

Posté il y a une semaine

bonjour,

 

 

merci pour ce travail qui je l'espère sera utile à tous.

 

A+


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