Les colorations trichromes utilisées en histologie animale
(Il existe pour chacune des techniques des kits qui contiennent tous les produits) .
Le travail peut se faire sur lame - mais dans ce cas il y a toujours le problème de la déshydratation naturelle ( faire une chambre humide en retournant un verre de montre sur la lame ) ou utiliser les Tubes de Borel ce que je fais mais cela nécessite de posséder plus de produits et d’ avoir une batterie d’au moins 6 tubes. .
Pour garder les produits dans les tubes de Borel qui ne sont pas étanche mettre entre le sommet du tube et le couvercle 2 à 3 couches de petits carrés de gant à usage unique - c’est parfait ) .
La durée d’action des colorants est très variable suivant les labos – je ne donne que selon mon expérience -
Trichrome de Masson (temps de préparation 25 minutes)
Après déparaffinage.
Hydratation sous le robinet quelques secondes ( toujours côté lame sans échantillon et éponger les lames après les opérations de la lavage à l’ eau – ou laisser égoutter ).
Hématoxyline de Mayer 10 Minutes.
Bain dans eau Bicarbonatée PH 7,8 à 8 3 minutes.
Rincer à l’eau courante.
Alcool à 60° simple passage.
Eosine alcoolique 2% 3 minutes.
Rincer à l’eau courante.
Rinçage dans eau acétique à 2% (5 allers /retours suffisent) dans 2 bains différents.
Bain avec Acide phosphomolybdique 3 minutes.
Egoutter la lame sans laver ni essuyer.
Bleu d’aniline (le pouvoir colorant étant intense il faut faire une dilution au ¼ avec de l’eau du produit vendu) 20 à 40 secondes maximum.
Rincer à l’eau courante.
Passage dans eau acétique à 2% (5 allers/retours).
Déshydratation Alcool à 60° ( grande surveillance car l’ alcool enlève l’ éosine ) puis alcool absolu ( le colorant ne bouge plus ) - surveillance de l’ état de différentiation sous bino).
Bain Xylène.
Résultats
Noyaux bleu
Cytoplasme rose
Tissus conjonctif bleu
Montage Eukit .
( A noter que le Labo Diapath propose un Trichorme de Masson qui commence comme le Trichrome de Goldner mais dans sa troisième partie remplace le vert lumière de Goldner par de l’ aniline ) .
Trichrome de Masson selon Goldner
Déparaffiner et hydrater les coupes par un passage de quelques secondes sous eau.
Ici le travail se fait sur lame dans une chambre humide (verre de montre retourné).
Recouvrir de 5 gtt d’ Hématoxyline ferrique selon Weigert réactif A ajouter 5 gtt du réactif B (réaction immédiate le produit devient noir) laisser agir 10 minutes.
Bleuissement à l’ eau courante pendant au moins 5 minutes ( l’ eau du robinet coule doucement sur le côté : lame sans échantillon ).
Laisser égoutter la lame puis
Recouvrir les coupes d’acide picrique solution alcoolique saturée pendant 5 minutes (évaporation rapide donc intérêt du tube de Borel) .
Laver à l’eau 30 secondes.
Fuchsine Ponceau selon Masson 4 minutes.
Égoutter la coupe. (si trop rouge on peut passer la lame sous l’eau ) (Contrôler sous bino).
Recouvrir les coupes avec acide phosphomolybdique (on peut travailler sur lame) pendant 4 minutes.
Égoutter la lame et surtout ne pas laver.
Recouvrir les coupes de Vert lumière selon Goldner pendant 2 minutes.
Déshydratation Alcool à 60° ( grande surveillance car l’ alcool enlève le vert lumière ) puis alcool absolu ( le colorant ne bouge plus ) - surveillance de l’état de différentiation sous bino).
Bains Xylène.
Montage Eukit.
Résultats
Noyaux bleu
Cytoplasme rose
Tissus conjonctif vert
Trichrome de Masson selon Gill II
Déparaffiner et hydrater les coupes par un passage de quelques secondes sous eau.
Le mieux est de travailler avec des tubes de Borel
Recouvrir les coupes avec //ou bain dans’ Hematoxyline de Gill II pendant 5 minutes
Laver à l’ eau courante pendant au moins 5 minutes ( l’ eau du robinet coule doucement sur le côté : lame sans échantillon ).
Recouvrir les coupes d’acide picrique solution alcoolique saturée pendant 5 minutes ( Pb :évaporation rapide donc intérêt du tube de Borel).
Laver à l’eau 30 secondes.
Fuchsine Ponceau selon Masson 4 minutes. (On peut aussi utiliser l’Eosine alcoolique à 2%).
Egoutter la coupe. (si trop rouge on peut passer la lame sous l’eau) (Contrôler sous bino).
Recouvrir les coupes avec acide phosphomolybdique (on peut travailler sur lame) pendant 4 minutes.
Egoutter la lame sans laver ni essuyer.
Bleu d’aniline (le pouvoir colorant étant intense il faut faire une dilution au ¼ avec de l’eau du produit vendu) 20 à 40 secondes maximum.
Rincer à l’eau courante.
Déshydratation Alcool à 60° ( grande surveillance car l’ alcool enlève le rouge ) puis alcool absolu ( le colorant ne bouge plus ) - surveillance de ‘l etat de différentiation sous bino).
Bains Xylène.
Montage Eukit.
Résultats.
Noyaux bleu.
Cytoplasme rose.
Tissus conjonctif bleu.
Trichrome de Gomori (intérêt surtout pour l’étude des tissus musculaires ).
Travailler sur lame.
Déparaffiner et hydrater les coupes par un passage de quelques secondes sous eau.
Hématoxyline de Mayer 10 Minutes.
Bain dans eau Bicarbonatée PH 7,8 à 8 3 minutes.
Ou
Hématoxyline de Mayer 45 secondes .
Passage sous l’eau du robinet 3 à 5 minutes pour le bleuissement.
Rincer à l’eau courante.
Couvrir la lame avec Colorant de Gomori pendant 10 minutes.
Laver à l’eau déminéralisée.
Acide chlorhydrique 50% pendant 15 secondes (maximum) .
Égoutter la lame.
Couvrir avec le Buffer Gomori pendant 20 secondes.
Laver avec l’eau déminéralisée
Déshydratation Alcool à 60° rapide puis alcool absolu (surveillance de l’état de différentiation sous bino).
Bains Xylène.
Montage Eukit .
Résultats
Myofibrille vert.
Matériel inter myofibrillaire rouge.
Tissus conjonctif vert brillant.
Noyaux bleu.
Le plus utilisé est le trichrome de Masson
Dominique.
Modifié par Dominique., 24 mars 2020 - 09:31 .
