Bonjour,
Pour répondre à Dominique, voici les principes de coloration en microscopie. Bonne lecture.
Colorants directs :
Il n'y a qu'à mettre le colorant en présence de la substance, dans un milieu convenable (solution) :
· Pour les colorants dits "substantifs", des liaisons hydrogène ou des liaisons de Van der Waals suffisent. En général, ce type d'association est faible et la teinture n'est pas solide.(avec le bleu de méthylène sur cellulose ou fibre protéinique). Cependant, si les dimensions de la molécule de colorant sont adaptées à la structure du produit à teindre, on obtient un résultat convenable. C'est le cas de plusieurs bis-azoïques sur la cellulose. Ainsi le rouge congo teint parfaitement la cellulose.
· Pour les colorants acides et basiques, il s'agit de véritables réactions chimiques acide-base avec des fonctions présentes sur le support.
Colorants acides :Leur molécule comporte une ou plusieurs fonctions acide ; en solution il apparaît donc des anions -CO2 - , -SO3- , -O- …..d'où leur appellation : colorants anioniques.Ils forment des liaisons ioniques avec des supports à sites cationiques, essentiellement –NH3+ et plus généralement des fibres protéiniques ou des polyamides en milieu acide.
exemple l'acide picrique, safran sont des acides fort.
Colorants basiques : Ils comportent des cations d'où leur autre appellation : colorants cationiques, essentiellement NH3+ . Ils forment des liaisons ioniques avec des supports à sites anioniques, notamment les -CO2 - , -SO3- , -O-.exemple le violet cristal, vert malachite
· Avec les colorants dits "réactifs", il se produit une réaction chimique entre le colorant et la substance, Il s'établit des liaisons covalentes. La teinture est très résistante mais ce procédé n'est pas très courant car il met en jeu des molécules qui ne sont pas très répandues.
Colorants par mordançage :
La fixation du colorant s'effectue par l'intermédiaire d'un "mordant", espèce qui assure le lien entre colorant et la substance. Le mordançage augmente l’affinité du colorant pour les structures à colorer (élective). Il peut changer la couleur finale de la coloration (différentiation). En pratique, le choix de la méthode repose sur diverses considérations : possibilité de réaction, teinte recherchée et également toxicité de certains éléments (Cr3+). On distingue
Onchrome : Le mordant est appliqué en premier, suivi du colorant. L'hématoxyline de fer de Heidenhain en est un exemple classique.
Métachrome : Le mordant et le colorant sont mélangés puis appliqués. Des solutions d'hématoxyline d'alun sont appliquées comme ceci. C'est probablement la façon la plus courante d'utiliser des colorants mordants en histotechnologie.
Afterchrome : Le colorant est appliqué en premier, suivi du mordant. Ce n'est pas souvent appliquer en histotechnologie,
1) Mordant Oxydants : Les mordants Oxydant on pour rôle de neutraliser les tissus réducteurs qui empêchent la coloration. Ces intermédiaires sont de deux types :
· Oxydants métalliques : Les ions métallique : Al3+, Cr3+, Fe3+, ou Fe2+, Cu2+ chélaté sont relié à la fois à la substances et au colorant. Les mordants sont
-soit des fixateurs à base de sels chromiques (Ac Chromique), d'acétate d'aluminium, de sels ferriques, de sel Osmique:Fixateur de Van Tellyesniczky, Fixateur de ZENKER soit des solution, Fixateur de HELLY. (On utilise Ac Chromique (K2Cr2O7 )mais c’est Cr3+ qui est présent dans le complexe ; la réduction peut se faire grâce à l’acide formique (COOH réducteur ) employé pour ajuster le pH.)
-Soit des solutions a appliquer avant les colorants : d'alun, Phosphomolybdique, Phosphotungstique, azoique. Agit dans la différenciation
· Polyphénol :Les liaisons font intervenir les doublets des atomes d'oxygène, donneurs d'électrons -OH, -O - .Ou encore les hydrogènes des –OH (liaisons hydrogène).
-soit des fixateurs ex Bouin l' Ac Picrique est un mordant et différenciateur avec des colorants acides.
Ex le formol :AFA de LOcquin
- Soit en Solution dans les colorants : l'aniline : safranine et violet de gentiane aniliné, l'ac phénique : Cristal violet Phéniqué (dans les colorants bactériologique),
Les Tanins agissent avec les colorants acide (orange G...) pour différentier les couleurs basiques qui donnent des sels polyacide solubles. Les tanins sont des polyphénols présents en abondance dans certains arbres : chêne (notamment dans les galles), châtaignier. Ce sont des hétérosides mais leur hydrolyse libère facilement deux molécules fondamentales : l'acide Gallique et l'acide ellagique. Par leurs multiples fonctions phénol ou phénate (en milieu alcalin) ils peuvent produire des chélations ou donner des liaisons hydrogène, autant de "dents" pour accrocher la cellulose ou les protéines d'une part et certains colorants d'autre part.
L'ac gallique est utilisé dans les coloration argentique,
2) Mordant Métalloïde :
· Métallique Incorporé : Le principe est de faire agir un sel métallique à chaux sur un colorant de base. Le colorant est dit « pré-métallisé » par chélation du sel sur la molécule colorante. Il forme une sorte de gel que l'on appel une Laque. Une laque est défini comme un complexe de coordination formé entre un ion métallique polyvalent et certains colorants. (même principe que l'hémoglobine). Souvent l'incorporation du sel entraîne un changement de couleur très soudaine et spectaculaire.
Alun de potasse (sulfate double d'alu et de K) et alun de fer ( sulfate double d'alu et de sesquioxyde de fer). Il forme une laque (intensifie la couleur) avec Hematoxyline et l'ac carminique qui on des propriétés électives. (Alun de fer)
· Métallique dissociable : Ce sont des colorants qui se fixent sur les substances mais qui ne donnent une teinte définitive stable qu'après avoir été trempés dans une solution d'ions métalliques ( sels basiques ou des sels neutres insolubles).
-soit des fixateurs : le sulfate de Cu de sulfate de cuivre (CuSO4). Chlorure de platine, de zinc, de mercure : Fixateur de Helly, FAA
- Soit en Solution avant coloration : Permanganate de potassium (cytologie), Iode (cristal violet en bactériologie).
- Soit en Solution après coloration : sulfate de fer (coloration à l'argent), Iode : utiliser sous forme de lugol ou teinture soit pour renforcer les couleurs (vert de méthyles, bleu victoria).
Il faut l'éliminer par lavage à l'eau car il détruit les colorations.
3) Mordants Basiques : ce sont des accentuateurs de colorants. On trouve le carbonate de potassium, l'ammoniaque, bicarbonate de soude, potasse caustique, borate de sodium. Dilution (1/10000)
On réserve l'appellation "colorants au soufre" à des substances organiques soufrées qui teintent les subtances parce qu'elles ont été retenues au sein de celles-ci grâce à une insolubilisation.
Le produit de la fixation du soufre sur une molécule appropriée (parfois un mélange de deux molécules différentes) est insoluble dans l'eau. On peut lui donner une forme soluble en le réduisant par action du sulfure de sodium en milieu alcalin. Il est alors apte à être absorbé par la substance.
Utilisé dans les colorations argentique avec
Soufré : métabisulfite de potassium, hyposulfite de sodium
Colorant nitrate d'argent ou chlorure d'or (osmium ou platine en microscopie électronique)
Oxydant hydroquinolone, formol
