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Coupes à la paraffine. Mon protocole.


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1 réponse à ce sujet

#1 Patrick-06

Patrick-06

    Acide nucléique

  • Membre confirmé
  • 96 messages

Posté il y a 2 semaines

Bonjour toutes et tous !  :)

 

Voici ma méthode pour réaliser des coupes bien fines et régulières.

 

Matériel:

- Paraffine -------------------Achetée ici

- Moule en silicone --------Acheté ici

- Agitateur chauffant ------Acheté ici

- Microtome de Ranvier - Acheté ici

- Rasoir coupe chou ------Acheté ici

- Affutage rasoir ------------Acheté ici

 

Le principe est simple.

Il consiste à faire fondre de la paraffine et à en enrober l'échantillon à découper 

 

Pour faire fondre la paraffine j'utilise un petit agitateur doté d'une plaque chauffante régulée. ( voir conseils plus bas )

agitateur.JPG

 

La paraffine en grains est mise dans un bécher de 100 ml. 

 

La paraffine étant fondue, je la verse dans le moule en silicone, jusqu'à mi-hauteur, j'y pose mon échantillon, puis je verse la paraffine jusqu'en haut.

moule2.JPG

 

Comme je suis pressé, je mets le moule quelques minutes au congélateur pour accélérer le durcissement.

Il n'y a plus qu'à démouler et à retailler le bloc obtenu avec un scalpel pour l'adapter au trou du microtome.

moule3.JPG

 

La longueur tu trou du microtome est d'environ 3.5 cm.

Bien caller le bloc tout au fond du moule.

Bien aiguiser le rasoir coupe chou, au moins toute les 10 coupes.

Personnellement, je tourne la molette du microtome de 20 à 40 divisions. Je ne sais pas si cela correspond à l'épaisseur finale de la coupe.

microtome.JPG

 

Pour ceux qui se procureraient le même agitateur chauffant :

 

- Bien régler la montée en puissance, faute de quoi, avec l'inertie, la température de la plaque va faire de grands écarts avant de se stabiliser.

Pour cela, faire un appui long sur la touche bleue, puis des appuis courts jusqu'à la lettre P, régler la valeur à 1 ( d'usine, il est à 4).

 

- La sonde de température est posée sur la plaque chauffante. Elle est conçue pour mesurer dans un liquide. Donc la température sur l'afficheur sera erronée.

Il convient de l'étalonner.

Chez moi, la paraffine fond quand l'affichage indique 45°.

 

Amitiés.

Patrick.

 

 

 

 

 

 

 

 


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#2 Dominique.

Dominique.

    Anthropoïde

  • Membre AUTEUR
  • PipPipPipPipPipPipPipPip
  • 865 messages

Posté il y a 2 semaines

Bonsoir Patrick

 

  Merci  beaucoup  pour toutes les précisions que  tu  nous apportes .

  Ton article  redonne  un coup de neuf  à une vieille  technique  ( on  s' écarte    doucement  de la moelle de  sureau  classique  ).

 

 Amicalement

    Dominique


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