Dominique. Posté(e) le 26 novembre 2015 Signaler Partager Posté(e) le 26 novembre 2015 (modifié) Comment couper le bois Le ramollissement Le bois est un tissu rarement abordé sur les sites de microscopie en raison de la difficulté qu’il y à obtenir des coupes correctes et à plus forte raison des coupes fines autour de 15 µm ( afin d’ éviter la superposition des couches de fibres.)Grâce à l’ intervention de Fabien, j’ai pu obtenir prés de l’université d’Anvers – laboratoire du bois , un ensemble de renseignements qui vont nous aider à pénétrer le sujet. Pour rendre le bois plus mou, la principale solution est de faire bouillir pendant quelques heures à plusieurs jours le bois dans la préparation suivante : Eau 10 volumes Glycérine 1 volume Une publication nous explique que la glycérine va intervenir sur la lignine sans casser les liaisons covalentes du polymère mais en modifiant les liaisons hydrogènes et les liaisons de Van de Waals ; la rigidité de l’ensemble du bois va ainsi diminuer. Le bois s’étudie selon trois plans de coupe - axial – longitudinal tangentiel et longitudinal radiale. http://cerig.pagora.grenoble-inp.fr/tutoriel/morphologie-fibres-bois/page03.htmIl est nécessaire de préparer ses échantillons avant la cuisson, en façonnant de petits cubes de 1 à 2 cm 3.Chaque échantillon doit être identifié pour être retrouvé ensuite ( Il est possible de les entourer avec un tout petit fil de cuivre comme celui utilisé pour les bobinages et faire un code avec le nombre de brins ou de fixer une étiquette résistant à l’ébullition.) Il est parfois possible de couper des bois tendres sans aucune préparation s ‘ils viennent d’être prélevés ..Pour la cuisson :Soit la simple cocotte minute , soit l’étuve réglée à 95 ° ( ce qui est plus facile pour des chauffages de plusieurs jours). Les échantillons seront mis dans des bocaux de type bocaux à conserve - la marque « Le Parfait » avec son rond de caoutchouc isolant répond bien à la demande. Cette mise en bocal fermé évite la perte d’eau et la modification de concentration de la solution.Pour la cocotte minute le contrôle du niveau de l’eau du récipient contenant le bocal nécessite de se relever la nuit. Autre mélange trouvé dans la littérature Alcool 95% 1 volume Eau 1 volumeGlycérine 3 volumes Si on désire faire une étude des fibres isolées : Pour dissocier les fibres avec plus de facilité il faut mettre les fragments dans une solution d’acide acétique dans un tube vertical. La préparation est prête quand les fragments sont tombés au fond. Pour les bois très durs - surtout les bois exotiques il existe d’autres formules : Il est possible d’utiliser l’acide Hydrofluorique ou l’Ethyléndiamine ( danger ++ ) mais on entre dans le monde de l ‘ hyper spécialisé. Les autres techniques, trouvées dans les anciens livres de microscopie ( acétone - acétate de cellulose etc). sont désormais abandonnés. La Section Le bois sera coupé à chaud - la lame du microtome sera recouverte du mélange eau + glycérine ( quelques gouttes). Les coupes sont réalisées avec un angle de coupe de 15 ° à 8 ° parfois. Soit par le microtome de l’amateur , à cylindre - mais pour couper , l’idéal est d’avoir une lame de microtome C plutôt que le rasoir habituel.Soit la vraie technique, l ‘ utilisation d’un microtome à glissière . ( par contre le microtome rotatif est sans intérêt) Pour les coupes transversales les coupes tangentielles et les coupes radiales l’idéal est de faire des coupes entre 10 et 15 µm - et 25 µm pour les études des perforations. Parfois les lamelles coupées ont tendance à s ‘enrouler, pour éviter cela il faut placer les coupes sur un porte-objet dans une goutte de glycérine et recouvrir avec une lamelle - il est demandé de passer rapidement le porte objet sur la flamme. La coloration de la lignine Coloration au vert d’ Etzold Tremper les coupes dans de l' eau de Javel ou du Dakin pendant 5 minutes . Certains proposent de la dilué au 1/3 .Rincer 2 fois .Colorer avec le colorant 10 minutes .Tremper dans une succession d’alcool Ethylique 30 – 70 - 95 .Tremper dans l’ isopropanol 100 ° .Chaque fois 5 minutes ( vérifier quand même l’état de la coloration à chaque étape car risque de différentiation trop poussé ) .Montage dans l’ Euparal ( qui est une résine dissoute dans l’alcool isopropylique). Faire une pression de 50 grammes sur la lamelle pendant quelques minutes et faire l’étiquetage de la lame à son habitude. Coloration à la SafranineTremper dans l’eau de Javel ou dans le Dakin.Rincer 2fois .Faire bain dans l’acide acétique à 2% ( pour d’autres10 % ).Rincer 1fois.Solution de Safranine à 1% pendant 3 à 5 minutes .Rincer 1 fois à l’eau .Rincer dans l ‘alcool à 50 ° jusqu ‘ à disparition de l’excès de colorant.Déshydrations à l’alcool à 100° .Immersion dans le Xylène ( si le liquide se trouble refaire un passage dans l’alcool à 100° ) Montage à L’ Eukit .Faire une pression de 50 g sur la lamelle de quelques minutes . Coloration Safranine - AnilineTremper dans l’eau de Javel ou dans le Dakin. Rincer 2fois .Faire bain dans l 'acide acétique à 2% ( pour d’autres10 % ).Rincer 1fois .Solution de safranine à 1% 3 à 5 minutes.Rincer plusieurs fois à l ‘eau Placer l’échantillon dans une goutte d’Acide Picrique (solution saturée ) .Mettre une goutte de solution d’Aniline très diluée - 0,05% durant 20 secondes .Certains proposent de chauffer à la flamme rapidement .Rincer dans l ‘alcool à 50 ° jusqu ‘ à disparition de l’excès de colorant.Déshydrations à l’alcool à 100° .Immersion dans le Xylène ( si le liquide se trouble refaire un passage dans l’alcool à 100°)Montage à L’ Eukit .Faire une pression de 50 g sur la lamelle de quelques minutes . Autres colorants de la lignine Réactif de Steinmetz - ref 1 – Montage dans l’Euparal - le tissu lignifié est coloré en jaune Vert d iode.Fuscine Basique.Vert de méthyle .Réaction de Mäule.Bleu de méthylène . Pour les ponctuations il est recommandé la safranine et l’ hématoxyline . Il existe d ‘autres techniques comme l’inclusion pour les coupes au microtome rotatif avec des résines - mais on s ‘écarte des possibilités d’un amateur. Réf https://books.google.be/books?id=Ohk_TXTy3c8C&pg=PA104&lpg=PA104&dq=microtomie+du+bois&source=bl&ots=3Ewj4Tm16j&sig=e04ICsvniLMjsZfdyhNKfvg_iI4&hl=nl&sa=X&ved=0CB8Q6AEwAGoVChMI_oT-qYWWyQIVwm8UCh1Z3wH2#v=onepage&q=microtomie%20du%20bois&f=false Vous trouverez sur ce site le livre de référence - tout est dedans ++ Réfhttp://www.iawa-website.org/links.html Cette référence vous ouvre la liste d ‘un grand nombre de sites en lien avec le bois et la botanique . Réf http://www.woodanatomy.ch/preparation.html Avec mes remerciements à Charles Indekeu de l’Université d’ Anvers ( qui constate que le nombre de scientifiques à s ‘intéresser au bois est de plus en plus mince.) Dominique Modifié le 26 novembre 2015 par Dominique. Lien vers le commentaire Partager sur d’autres sites More sharing options...
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