[Geotricum et Camembert]

Bonsoir Jhaw

On obtient une image identique en microscopie optique mais il est difficile d’ avoir sur une photo un si aussi bel ensemble que celui offert par le MEB

 

Bonsoir Mpx

 

« Cela le distingue des "peaux blanches" des camemberts industriels »

 

Je pense qu une partie du secret est dans cette phrase

J’ ai utilisé un fromage au lait pasteurisé - or ce type de fromage utilise surtout un ensemencement avec le Geotrichum

Donc je vais refaire l’expérience avec un fromage au lait cru traditionnel

Le geotrichum et le penicillium n’apprécient pas les même Ph et la même température - 2 paramètres à prendre en compte -

On recommence la manip

 

Les photos du Penicillium sont très belles

[Geotricum et Camembert]

Segmentation d’un fragment d’hyphe

 

Les arthrospores sont le processus de la multiplication Asexuée des Geotricum

Arthrospore en germination

 

Conclusion :

le feutrage blanc du Camembert est lié au développement d’un Geotrichum ici probablement Geotrichum album.

Pourtant on parle toujours du Penicillium camembertii qui doit se développer selon la tradition.

 

Comment se débrouiller pour le faire apparaître ? Je n’ai pas encore la réponse. A suivre

[Geotricum et Camembert]

Etude du Camembert

 

Mettre un peu de camembert sous le microscope est une expérience décevante - on l’a tous constaté à nos dépend dans nos débuts - les structures superficielles ont été détériorées lors du salage et du conditionnement .

 

D’ où la nécessité de prendre le problème autrement.

D’ abord pour identifier le mycélium il est nécessaire de le cultiver

Faire la préparation

- lait (écrémé ou pas) UHT longue conservation

- Glucose

- Agar

- autoclave dans la cocotte minute pendant 20 minutes

-diviser dans les boites de Petri

- une fois refroidie ensemencer le centre de la boite en faisant un petit trou au couteau et en le remplissant d un peu de raclure de la croûte du camembert

-pH de la préparation 6 (papier PH)

- dans cette expérience mise de la culture à l’étuve à 25 degrés

 

La pousse apparaît dès les premières heures - 5 jours après on a l’image suivante

 

 

Mycélium blanc - feutrage très doux et très dense -légère odeur de vieux fromage

 

Le prélèvement d ‘un fine tranche de la préparation est réalisé–comme une tranche de gâteau - placé sur un porte objet

Fixation Alcool 95 - Bleu coton lactophenole - adjonction d’ un peu de lactophenol avant de mettre la lamelle

 

 

L ‘examen de la zone superficielle montre l’image suivante

 

on constate qu il n’ existe ni conidiophore - ni conidies ( voir penicillium expansum ) - Simplement un extraodrinaire feutrage d hyphes sans aucune structure reproductrice

 

 

L ‘ exploration de la zone immergée montre une prolifération considérable d’hyphes dont une bonne partie sont en cours de fragmentation

 

 

Les hyphes se fragmentant donnent les Arthrospores (coloration bleu de méthylène)

Segmentation d’un fragment d’hyphe

[Penicillium expansum]

Pour que l ' exposé soit complet il est nécéssaire d' ajouter

 

une image de la source

 

 

une image de la pomme decoupée ( cela a de l' importance - il faut noter le caractére bien limité de l' atteint qui est une caracteristique de Penicillium expansum - il existe d 'autres moisissures dont l' atteinte est morphologiquement trés differente - on en repalera plus tard )

 

 

une image de la culture - l' analyse de cette culture est une clef de la determination (sa consistance - et surtout ici sa couleur - bleu verdâtre en fin de criossance mais au debut de la pousse trés bleue ciel

 

 

et une image des spores

 

[Penicillium expansum]

Mpx c ‘ est mon premier envoi et la prochaine fois je ferai une succession (- a suivre – suite ) comme il se doit : partir de l image de la pomme ( ou autre ) atteinte à l’ analyse de l’ image microscopique finale en passant par l aspect de la culture et du revers de la boite indispensable dans la clef de détermination ( ici l article initial écrit contenait 10 photos) - pour le dessin je vais essayer de trouver un format plus acceptable

 

-

A bientôt pour un second sujet

[Penicillium expansum]

Jean Marie , il manque en effet un bout d ‘explication - ‘

L’ ensemencement se fait au milieu de la Boite de Petri en enlevant à la pointe couteau le volume d’un grain de mais et en remplissant le trou avec la pulpe de pomme infectée

A 18° on voit dès le lendemain les hyphes se développer - à l’étuve à 25 ° c’est encore plus rapide

L’extension de fait de manière plus ou moins centrifuge ( j’ai une belle photo mais j’ étais au-delà des 800 ko réglementaires )

- Mpx , les boites doivent être refermées rapidement car la contamination aérienne parasite est très intense d ès qu on s intéresse un certain temps aux moisissures dans le même endroit .

 

Bien amicalement

[Penicillium expansum]

Durant l’hiver la visite au fruitier permet de constater que certaines pommes se mettent

à pourrir.

 

Etude de la Pulpe contaminée

L’exploration de la zone contaminée montre que les hyphes de la moisissure envahissent l ‘espace cellulaire et inter cellulaire de la pulpe

A un grossissement de 400 on distingue nettement cet envahissement par les hyphes

 

 

Les secrétions enzymatiques des hyphes aboutissent à une perte de l’ adhésion entre les cellules et à un modification chimique de l’ intérieur des cellules - d’où le caractère mou de la pomme pourrie et sa couleur brune .

 

Si on regarde la préparation on découvre des conidiophores - reproduction asexuée - - avec un grand nombre de spores - ce développement est situé dans les espaces cellulaires et inter cellulaires de la pomme ( je pensais qu on ne trouvait cette forme qu’une fois le mycélium arrivé à l’ air libre – le prélèvement a bien été fait en profondeur ! ) - mais la structure des conidiophores est dans ce cas très particulière.

 

 

 

Coloration bleu coton lactophenol (x 400)

A comparer avec la forme aérienne de la fin de cette présentation

 

(A noter qu ‘ il existe une autre manière de fabriquer les spores (forme sexuée ) au sein de la masse cellulaire –les Zygospores -mais je n’ai rien trouvé dans cette préparation - )

 

A qui appartiennent ces hyphes ?–Pour répondre il faut faire se développer la forme aérienne.

L’enquête va commencer la fabrication du milieu PGA – méthode personnelle

Cuire 200 g de pomme de terre coupée en petits carrés avec la peau dans 1 litre d’eau

Durant ¼ d heure - fragmenter les morceau grossièrement et remuer puis filtrer - à travers un torchon - ramener à 1 litre en ajoutant de l’eau -

Mettre ce milieu dans un bocal à stérilisation ( comme pour les conserves de haricots verts ou autres ) et stériliser à la cocotte minute durant 1 heure

Après la stérilisation on prélève 500 cc – (on congèle le reste pour plus tard) et on ajoute Glucose 10 g –Agar 10 g

Nouvelle autoclavage de ½ heure dans la cocotte minute - à 110 ° ( personnellement une fois le milieu autour de 50° j’ ajoute 5 cc d ’ engrais liquide pour hortensia (apport d’Azote et acidification du milieu )

Répartition du milieu dans les boites de Pétri - ou couvercle de bocaux à stérilisation

 

Au bout de 4 jours la boite fermée étant laissée à la température de la pièce on découvre une jolie culture

 

Avec un bistouri – on découpe de fines lanières qui sont transportées sur un porte objet et mise sur la tranche , le but est d’éviter de toucher aux structures aériennes ( la technique du drapeau de scotch sur une cure dent est aussi utilisable)

 

Traitement directement sur la lame

-Alcool 95 (agent mouillant) -Bleu coton lactophenol (laisser agir 1minute)

Adjonction de Lactophenol avant de mettre la lamelle puis de comprimer un peu.

 

 

Etude de l’image et mesures

Thalle bleu -verdâtre

Pénicille long –tête en cylindre

Structure verticillée

Conidiophores isolés ( 50-500µm)

Lisses

Metules en verticille 2 à3 (12µm)

Cylindriques

Phialides en verticille 2 à 4

Cylindriques ( 12µm)

Conidies (+/-) elliptiques

Lisses ( 3 à 5 µm)

 

Hypothèse : Penicillium expansum

(Ref : moisissures utiles et nuisibles

B Boton et coll. - Masson 1990)