Vardar
-
Compteur de contenus
916 -
Inscription
-
Dernière visite
Messages posté(e)s par Vardar
-
-
Bonjour Vardar
Merci de nous exposer les techniques de cultures des protozoaires . Ce sujet est extrêmement intéressant .
Mais tenant compte de la dégradation des milieux quelle est la bonne fréquence des repiquage ?
Amicalement
la plus simple est de vider les 3/quarts du contenant toutes les semaines et de rempacer par du milieu frais
T° ambiante (15-25°C)
Oui, tout dépend d'où tu es.
Tout le monde ne vit pas dans cette fourchette de température, d'où ma remarque.
c'est une température d'intérieur l'été les gens du sud est changeront le mileu plus fréquemment
on passera au sujet T+ controlée plus tard
-
Je commence par des techniques simples: non contrôlées et à T° ambiante (15-25°C) on passera à plus complexe après
B)
-
Bonjour
Je propose de poster quelques techniques de base pour la culture des protozoaires
je commence par les ciliés; dites moi si cela vous intéresse.
La base est l'eau de Volvic: peu minéralisée et bien controlée elle a toujours été favorite pour les protistologues et notamment l'équipe de de Puytorac à Clermont.
D'abord les ciliés brouteurs, mangeurs de bactéries:
Techniques simples:
10-20 ml de Volvic + 1 grain de riz cru
20 ml de Volvic + 1 grain de blé semi cuit (Ebly)
Les bactéries présentes se développeront.
Décoctions:
5 grains de blé crus (ou grains de riz) pour 100 ml de Volvic: faire bouillir 5 Minutes: répartir dans des tubes (sans le blé)
Laitue: prendre des feuilles sans tige: laver, sécher sur sopalin
cuire au four 180°C jusqu'à ce qu'elles brunissent légèrement (Surveiller , en général 5-10 min)
faire bouillr 2 grammes dans 1 litre de Volvic.
C'est un milieu très efficace et reproductible.
Lait: 1 goutte de lait pour 20 ml: attention ce milieu s'acidifie)
lait en poudre: 2g dans 1 litre de volvic (péalablement bouillie)
Ces milieux permettront la culture de Paramecium, Colpoda, colpidium, Blepharisma, tetrahymena, certains Euplotes, etc...
Levure: 1g/litre: utiliser sans chauffer
Je conserve des Stylonichia et Oxytricha (qui apprécie les particules). attention milieu turbide.
Une astuce pour un résultat inédit: Récupérer le jus frais d'huitres: laisser infuser quelques jours: surprise ! des ciliés que vous rencontrerez peut être pour la première fois (notamment des tintinides); ciliés marins ou d'eau saumatres.
Pour un résultat meilleur: laisser l'eau dans la coquille (sans huitre). garder en milieu humide (boite plastique)
Voilà pour aujourd'hui je continuerai si intérêt (culture des carnivores, etc...)
-
Un petit secret: pour les fêtes: récupérer le jus d'une huitre ou deux: laisser infuser qques jours: puis admirez ! vous verrez des ciliés que vous n'avez probablement jamais vu !
des ciliés marins ou résistants au sel. le mieux est de laisser le jus dans la coquille (en enlevant l'huitre). Bonne dégustation et belles observations !
vous m'en direz des nouvelles ! ;-)
-
On utilise aussi beaucoup l'albumine glycérinée.
-
il est plus rare que Halteria
Joli cliché apical et latéral
-
cette espèce passe très bien en Nigrosine puis dessication
-
C'est joli ! ça fait toujours qque chose d'observer ses propres cellules non ?
B)
-
Bonjour vardar,
Malheureusement c'est pas de moi. :(
Il te faut combien de grammes ? je peux peut être te dépanner ??
Amicalement
Seb
C'est sympa. Un gramme suffirait. J'ai vu que Marcel Lecomte en avait je lui ai demandé; en attente de sa réponse.
-
Jolie photo ! c'est de toi ?
Je cherche de l'acridine orange également pour tester mon dispo fluo bricolé avant d'aller plus loin.
-
Il existe en fait trois types de fluorophores Qdots qui émettent respectivement à 525,545 et 565 nmOk.....
Alors dans mon premier post je dis "Ex : 513 à 593 nm" je me suis trompé, j'ai utilisé le filtre de λ 435 - 480 nm, donc oui pour le FITC.
Vu que tu enseignes la fluo, j'ai une question, as-tu déjà utilisé les filtres en 655 nm à utilisé avec le fluorochrome Qdot ?
en fait on m'en a donné un neuf de chez OMEGA (400$) il est installé (je peux avoir 3 filtres dans le touret) mais je n'ai jamais pu l'essayer, je crois qu'il peut servir en immunofluorescence avec ce fameux Qdot..
As-tu plus d'info ?
Curieusement
Seb
voici le spectre à 565 nm
http://www.lifetechnologies.com/content/dam/LifeTech/Documents/spectra/images/QD565SA.jpg
Tu pourras donc utiliser Qdot à deux couleurs différentes (avec ton FITC et le nouveau). Ce produit très cher sert essentiellement pour les cellules en fluorescence. C'est très joli à voir.
Pour ma part je ne l'utilise pas (ou très peu).
Je travaille (ou plutôt j'ai travaillé) beaucoup la technologie de FRET: Fluorescence Resonance Energy Transfer notamment pour la mise au point de test de Binding ou d'activité enzymatique. Donc peu de microscopie.
Juste une r
Il semble que tu colore l'ADN en vert et les lysosomes en Orange (l'acridine est un bon marqueur lysosomial car il est sensible au pH ; acide dans ce cas)
-
En fait je me suis trompé ma question était pour SébastienD'accord, je comprends mieux.
Pour ma part, je ne fais pas de la fluo.
J'ai des microscopes qui en font, mais je n'ai jamais eu l'occasion de les utiliser. (Confus :mellow: )
Je ne suis pas non plus spécialiste de la chose, (et pour cause) .
Je connais vaguement le principe :
Exciter une molécule fluorescente que l'on a fixée sur une cible choisie (par exemple le cytoscquelette ) avec des UV puis filtrer les UV avant qu'ils n'aillent léser l'oeil.
Seules les structures qui ont fluorescées, c'est à dire qui ont réémis des photons dans le visible, sont visibles sur fond noir .
Ensuite, il y a des filtres de différentes longueurs d'onde en fonction des colorants choisis.
Je ne peux pas en dire plus.
Cordialement.
Concernant le principe de la fluo ça va (je l'enseigne)
Ma question pour Seb est donc: quels sont les filtres utilisés ?
L'acridine fluoresce bien avec les filtes FITC (ex 480/Em 530) est ce le cas ?
-
ma question est naïve techniquement
je ne connais pas bien la technologie
en bref: utilises tu un filtre pour l'excitation ou ta source est elle précise (en longueur d'onde style laser, led, etc...)
pour la visualisation quel est ton filtre d'émission ?
-
Tryphon en fluo quels sont les filtres ?
Polypore du bouleau Piptoporus betulinus
dans Dominique
Posté(e)
Merci pour cette étude complète !
Je regaderai les champignons Polypores d'un autre oeil..