Dominique. Posted December 5, 2022 Report Share Posted December 5, 2022 (edited) suite à l’ article de Patrickhttps://forum.MikrOscOpia.com/topic/19518-essai-de-coloration-double-safranine-bleu-astra/ La coloration Safranine Bleu / Astra est une excellente formule de coloration une fois réglé les dilutions des colorants que l’ on possède .Cette adaptation est toujours individuelle en raison des nombreux paramètres qui entrent en jeu et qui diffèrent d’un laboratoire à un autre .Coupe d'une tige de géranium[ Un autre paramètre à bien maîtriser est la réalisation de la coupe – plus la coupe est fine meilleur sera le résultat – Mais réaliser une coupe très fine et homogène n’ est pas facile et le type de microtome que l’ on choisit à une place considérable Quels sont les types de microtomes : 2 types de microtome sont surtout à retenir. A Microtome à cylindre L’ échantillon doit être maintenu par un support - nos anciens utilisaient la moelle de sureau ( c’est cette technique qui est à l’ origine de très nombreuses découvertes en botanique) De nos jour la moelle de sureau est remplacée par le polystyrène , il faut au préalable couper à l’emporte-pièce un cylindre de polystyrène d’une taille un peu supérieure au diamètre du cylindre et le mouler en le roulant entre les mains. Avantage une excellente compression de l’ échantillon qui ne bouge pas durant la coupe - le cylindre de polystyrène tranché en son milieu et contient l’ échantillon parfaitement immobile - le cylindre du polystyrène ayant été modelé un peu au-dessus de diamètre du cylindre - il y est introduit avec certaine force donc parfaitement calé 2 types --1 maintenu dans une main – Ranvier le plus ancien qui a l’avantage du controle à la fois du Ranvier et de la lame manié par l’ autre main .-- 2 fixé à une table , cette fixation permet de faire glisser la lame parfaitement horizontale sur le plan du support en utilisant les deux mains Car le point important est la position de la lame 2 types a -- L’utilisation d’un couteau de type barbier pose deux difficultés ** aiguiser :le problème est que l’ obtention d’un fil très fin nécessite un excellent entrainement ( connaissance que nos anciens avaient et qui ne s’ invente pas) - .** bien utiliser :le passage de cette lame strictement parallèle au plan du support est des plus aléatoire - même si on a l’ impression de bien faire le geste. b-- L’ utilisation simplement d’un lame plate et très rigide ( comme les lames Feather ) qu’ il est très facile de faire glisser sur la surface du support ; de ce fait il est facile d’ obtenir un parallélisme parfait ( en exerçant une certaine pression pour que cette lame garde un contact absolu avec le support ) L’ idéal est l’ utilisation d’une lame de microtome ( ces lames ont toutes les qualités - leur problème est qu’ elles sont vendues entre 80 et 150 euros les 50 lames B Microtome à mâchoires Avantage apparent - on peut fixer facilement l’ échantillon (directement ou inclus dans la paraffine ) -inconvénient il y a toujours un micromouvement de flexion lors du passage de la lame ce qui fait une coupe inhomogène en épaisseur. A moins d’utiliser une lame de microtome fixée à un support qui va glisser sur la surface du microtome. (image dans l’article de MikrOscOpia )https://forum.MikrOscOpia.com/topic/17214-microtome-%C3%A0-main/ En conclusion quel que soit le choix réalisé il faut s’ entraîner longtemps avant d’avoir la parfaite maîtrise de l’appareil. Dominique Edited December 5, 2022 by Dominique. Link to comment Share on other sites More sharing options...
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