jean-jacques B Posté(e) le 19 janvier Signaler Partager Posté(e) le 19 janvier (modifié) Comment préparer les diatomées si on s’intéresse à leur frustule Technique : Matériel Quelques petites éprouvettes, pipettes plastiques et quelques petits flacons en verre (nombreux fournisseurs sur le Net ) Pour la table chauffante un chauffe plat fait l’affaire. Pour l’étuve les fours de cuisine sont utilisables - souvent leur thermostat va de 30 à 250 °C Pour la centrifugeuse on trouve sur amazone à moins de 140 euros fabrication chinoise - par contre avant de l’utiliser il faut lui faire un piètement lourd sinon elle se promène sur la paillasse . Produits chimiques Eau déminéralisée (grand magasin) Eau oxygénée (H²O² 30 volumes (pharmacie) Acide chlorhydrique de ménage (grand magasin) Naphtax (faire venir d’ Angleterre Brunel microscopie UK . Dans ce cas il faut ajouter le diluant qui est le Xyléne ou le Toluéne ( vente en ligne site : Mon droguiste) puis qu’il n’ est pas possible de faire voyager ce type de solvant -On remplit donc le flacon contenant le Naphtax solide contenu dans le flacon dès son arrivée . Tout commence par le prélèvement Il faut brosser dans une petite cuvette les pierres et les algues sur lesquelles les diatomées habituellement reposent. Première étape : enlever les substances organiques qui sont présentes dans le milieu. Bien secouer le prélèvement pour l’homogénéiser Remplir plusieurs tubes à essai y mettre 10 cc par tube des prélèvements. Centrifuger 3 mn à moins de 2500 tours/ mn pour ne pas casser les frustules. On peut faire plusieurs centrifugations de façon à avoir un surnageant clair. Vider une grosse partie du surnageant avec une pipette. Deuxième étape détruire les matières organiques Mettre dans chaque tube centrifugé 3 ml H2O2 30 ml .Au-dessus de chaque tube mettre une bille en verre ( ce qui permet de fermer le flacon de manière non hermétique .) Mettre les tubes dans un petit pot en verre contenant de l’ eau – maintenir à 100 degrés pendant 2 heures Normalement le milieu a blanchi - Sinon ajouter un peu d’eau déminéralisée dans le tube et poursuivre jusqu’ au blanchiment. Ajouter dans chaque tube 1 à 2 ml d’Acide chlorhydrique du commerce. Secouer les tubes et attendre 30 minutes la fin de la réaction Faire un rinçage pour enlever les produis chimiques . Pour cela centrifuger les tubes à 2000 tours / m pendant 3 minutes .Enlever le surnageant et faire cela 3 fois Troisième étape la préparation des lames Dans un flacon contenant un peu d’eau déminéralisée faire le transfert de l’échantillon. Mais comme l’échantillon est souvent trop dense il faut le diluer Pour ce faire dans un autre flacon mettre eau déminéralisée quelques ml (centimètre-cubes ). Ajouter doucement au goutte à goutte sur l’échantillon jusqu’ à ce que l’ eau de flacon soit légèrement trouble - Homogénéiser le liquide en secouant le flacon. Sur une lame porte objets mettre 2 couvre objets sur lesquels on va déposer avec précaution quelques gouttes de l’échantillon sans dépasser les bords Ensuite on peut ajouter à l’ échantillon un peu d’eau et refaire un prélèvement cela permet d’ avoir des préparations à des dilutions étagées. Soit laisser à l’ air libre pour attendre la déshydratation sur les couvre-objets soit placer dans une étuve à 30 degré ( à trop forte température les diatomées ont tendance à s’ agglomérer ) Une fois la préparation séchée pousser les couvre objets sur le côté de la lame et mettre au centre 1 gtt de Naphtax. Retourner les couvre objets sur la goutte de Naphtax . Appuyer un peu. Pour faire évaporer le solvant placer des lames sur une plaque chauffante. Appuyer un peu pour faire partir les bulles. On peut ensuite gratter l’excès de Naphtax sur les côtés des couvre objets . Etiqueter la lame date / origine:/nom binomial si on y arrive Examen au X 1000 Vidéo de la réalisation du processus dans un laboratoire spécialisé. Résulats : Le problème majeur rencontré est celui de la séparation des Diatomées et des sédiments, je n'ai toujours pas la solution. Jean-Jacques Modifié le 19 janvier par jean-jacques B Lien vers le commentaire Partager sur d’autres sites More sharing options...
Dominique. Posté(e) le 22 janvier Signaler Partager Posté(e) le 22 janvier (modifié) Bonjour Jean-Jacques Comme l'a rappelé Jean-Luc le bon moyen est de laisser sédimenter - Les diatomées sont dans la zone inférieur du surnageant . Donc en n' allant pas les chercher dans le sédiment il est possible se débarrasser de tous ces micro cailloux . Le flacon doit être incliné à 45 degrés. On peut faire cela plusieurs fois . ( on peut centrifuger ou attendre une nuit ). Amicalement Dominique. Modifié le 22 janvier par Dominique. Lien vers le commentaire Partager sur d’autres sites More sharing options...
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