Dominique. Posted December 14, 2022 Report Share Posted December 14, 2022 Technique de préparation Dakin versus eau de javel La discussion en cours sur la technique de préparation des échantillons botaniques porte sur l’utilisation du dakin versus eau de javel.https://forum.MikrOscOpia.com/topic/19530-tige-transversale-de-crassula-ovata-arbre-de-jade-safranine-et-bleu-astra/Des coupes de tige de feuille de choux ont été réalisées.Coloration par Safranine / Bleu Astra selon le protocole de Patrick adapté à l’âge des produits colorants du labo.Safranine 1 gtt - eau 3 gttBleu Astra 1 gtt - eau 6 gtt Utilisation du Dakin -- bain de Dakin 14 minutes:Les cellules sont assez bien vidées mais pour cet échantillon le vide parfait n’est pas acquis. (de plus l’échantillon fait 2 couches cellulaires).Dans la même série de coupe ayant subie le même traitement il est obtenu une coupe beaucoup moins réussie - La différence par rapport à la première coupe est que son épaisseur est plus importante - on peut en effet trouver plusieurs couches de cellules . Utilisation de l’eau de javel du commerce non dilué 14 minutes. Les cellules sont nettement plus vides mais l’échantillon a été abimé.Que conclure Le Dakin est un peu faible mais n’abime pas.L’eau de javel du commerce est plus active mais perturbe l’échantillon.Il faut donc diluer l’eau de javel .La bonne dilution reste à trouver.Mais il faut noter que le plus important est l’ épaisseur de la coupe , plus elle est mince et meilleur est le résultat - Ce résultat dépend donc du microtome et de la manière dont on utilise le microtome. ( je me demande quelle est la précision des Verniers sur ce type d’instrument ).La coupe idéale ne doit faire que l’épaisseur d’une cellule. En réalisant un grand nombre de coupes on dont bien en trouver une ou deux.Amicalement Dominique Link to comment Share on other sites More sharing options...
Admin Tryphon T Posted December 14, 2022 Admin Report Share Posted December 14, 2022 Bonjour Dominique, Tes expériences sont concluantes.Ce qu'il faut retenir dans l'histoire, c'est que c'est le chlore (l'ion Ch- ) qui oxyde la matière vivante en cassant les liaisons dans les protéines.Que ce soit du Dakin ou une autre solution de Chlore ce qui compte dans notre histoire, c'est la concentration en chlore.Elle s'exprime en ppm (partie par million) 1 ppm = 1mg/L5 000 ppm pour le Dakin 26 000 ppm pour l'eau de Javel Dakin : Concentration 0.5%ppm 5 000 Eau de Javel :Concentration 2.6%ppm 26 000 L'eau de Javel est donc 5.2 fois plus concentrée que le Dakin. (2.6/0.5) Donc:260 000 ppm pendant 1 mn = 5 000 ppm pendant 5.2 mnIl faut laisser 5.2 fois plus longtemps la coupe dans le Dakin que dans l'eau de Javel.S'il faut 20 mn avec du Javel, il faudra 1h 44 mn avec du Dakin. Attention, le chlore s'évapore et donc les solutions perdent de l'efficacité avec le temps. (18 mois pour la Javel)Pour que les durées des bains soient comparables, il faut évacuer les résidus cellulaires plus souvent quand la concentration est plus élevée.Si il y a beaucoup de résidus, le chlore n'agit plus.Je recommande donc de changer le bain éclaircissant plusieurs fois pendant le traitement de la coupe.(ou bien sûr mettre une grande quantité de javel en agitant la solution (et la coupe) fréquemment) Amicalement. Link to comment Share on other sites More sharing options...
Admin Tryphon T Posted December 15, 2022 Admin Report Share Posted December 15, 2022 Bonjour Dominique, tous, Ne vous méprenez pas sur mes intentions. Il faut quand même rendre à César ce qui appartient à Jules, c'est à dire parler des deux colorations présentées par Dominique pour illustrer le propos. Dans les deux cas, les colorations de Dominique sont parfaites!Je parle de la perfection relative au but recherché: colorer les membranes pour différencier les tissus qu'elles supportent.Les tissus sont parfaitement identifiés et le peu de contenu cellulaire qui reste, n'est absolument pas gênant.Effectivement la solution de Javel a l'air trop prolongée (ou trop forte, ce qui revient au même) car elle entraine une détérioration partielle de la coupe par fragilisation.Mais le résultat reste parfaitement exploitable. On ne peut qu'admirer ces résultats et la pertinence du test comparatif. Amicalement. Link to comment Share on other sites More sharing options...
Patrick-06 Posted December 15, 2022 Report Share Posted December 15, 2022 Bonsoir et merci pour ces essais et ces explications. ;) Je n'ai pas eu trop le temps ces temps-ci, mais je vais aussi refaire des essais sur mon "Arbre de Jade" avec de l'hypochlorite 12,6 % diluée. À bientôtPatrick Link to comment Share on other sites More sharing options...
Admin Tryphon T Posted December 16, 2022 Admin Report Share Posted December 16, 2022 Bonjour Patrick, Ta solution d' hypochlorite de Na est à ? 47% = 14.9 °50% = 15.85 ° Ou bien à 12.6 % ce qui donne 39.75 ° soit 126 000 ppm C'est un ou les autres. Dans tous les cas, il faut donc sérieusement diluer ! Attention les yeux ! Pour rappel les berlingots de Javel à diluer sont à, 9.6° soit 39.3% Amicalement. Link to comment Share on other sites More sharing options...
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