Technique de préparation Dakin versus eau de javel

[Dominique.]

            Technique de préparation Dakin versus  eau de javel

 

La  discussion  en cours  sur la technique  de préparation  des échantillons   botaniques porte sur l’utilisation du dakin versus  eau  de javel.

https://forum.MikrOscOpia.com/topic/19530-tige-transversale-de-crassula-ovata-arbre-de-jade-safranine-et-bleu-astra/

Des coupes  de  tige de  feuille de choux   ont  été réalisées.

Coloration    par Safranine  /  Bleu Astra   selon  le protocole de Patrick adapté  à l’âge des  produits colorants  du labo.

Safranine  1 gtt - eau 3 gtt

Bleu Astra  1 gtt - eau 6 gtt

 

Utilisation  du Dakin  --  bain de Dakin 14 minutes:

Les cellules sont assez   bien vidées   mais pour cet échantillon  le vide parfait  n’est pas acquis. (de plus l’échantillon  fait 2 couches  cellulaires).

Dans la même série de coupe  ayant  subie le même traitement   il est obtenu  une coupe   beaucoup  moins réussie  -  La différence par rapport  à la première  coupe    est que son épaisseur   est plus importante  - on peut  en effet  trouver  plusieurs  couches  de cellules .

 

Utilisation de l’eau de javel  du commerce  non  dilué  14 minutes.

 

Les cellules  sont nettement plus  vides   mais l’échantillon a été abimé.

Que conclure 

Le  Dakin  est un peu  faible  mais  n’abime  pas.

L’eau  de javel  du commerce   est plus active  mais  perturbe l’échantillon.

Il faut  donc  diluer  l’eau de javel  .La  bonne  dilution  reste  à trouver.

Mais  il faut noter   que le plus  important  est l’ épaisseur de la coupe   , plus elle  est mince  et meilleur  est le résultat  - Ce résultat dépend   donc du microtome   et  de la manière  dont  on  utilise le microtome. ( je  me demande  quelle  est  la précision  des Verniers  sur  ce  type d’instrument ).

La coupe idéale   ne doit faire que l’épaisseur  d’une  cellule.  En réalisant  un grand nombre  de coupes  on  dont  bien en trouver  une ou deux.

Amicalement

                       Dominique

[Tryphon T]

Bonjour Dominique,

 

Tes expériences sont concluantes.

Ce qu'il faut retenir dans l'histoire, c'est que c'est le chlore  (l'ion Ch- ) qui oxyde la matière vivante en cassant les liaisons dans les protéines.

Que ce soit du Dakin ou une autre solution de Chlore ce qui compte dans notre histoire, c'est la concentration en chlore.

Elle s'exprime en ppm (partie par million) 1 ppm = 1mg/L

5 000 ppm pour le Dakin  26 000 ppm pour l'eau de Javel

 

 

Dakin : 

Concentration 0.5%

ppm 5 000

 

Eau de Javel :

Concentration 2.6%

ppm 26 000

 

L'eau de Javel est donc  5.2 fois plus concentrée que le Dakin. (2.6/0.5)

 

Donc:

260 000 ppm pendant 1 mn = 5 000 ppm pendant 5.2 mn

Il faut laisser 5.2 fois plus longtemps la coupe dans le Dakin que dans l'eau de Javel.

S'il faut 20 mn avec du Javel, il faudra 1h 44 mn avec du Dakin.

 

Attention, le chlore s'évapore et donc les solutions perdent de l'efficacité avec le temps. (18 mois pour la Javel)

Pour que les  durées des bains soient comparables, il faut évacuer les résidus cellulaires plus souvent quand la concentration est plus élevée.

Si il y a beaucoup de résidus, le chlore n'agit plus.

Je recommande donc de changer le bain éclaircissant plusieurs fois pendant le traitement de la coupe.(ou bien sûr mettre une grande quantité de javel en agitant la solution (et la coupe) fréquemment)

 

Amicalement.

[Tryphon T]

Bonjour Dominique, tous,

 

Ne vous méprenez pas sur mes intentions. Il faut quand même rendre à César ce qui appartient à Jules, c'est à dire parler des deux colorations présentées par Dominique  pour illustrer le propos.

 

Dans les deux cas, les colorations de Dominique sont parfaites!

Je parle de la perfection relative au but recherché: colorer les membranes pour différencier les tissus qu'elles supportent.

Les tissus sont parfaitement identifiés et le peu de contenu cellulaire qui reste, n'est absolument pas gênant.

Effectivement la solution de Javel a l'air trop prolongée (ou trop forte, ce qui revient au même) car elle entraine une détérioration partielle de la coupe par fragilisation.

Mais le résultat reste parfaitement exploitable.

 

On ne peut qu'admirer ces résultats et la pertinence du test comparatif.

 

Amicalement.

[Patrick-06]

Bonsoir et merci pour ces essais et ces explications.  ;)

 

Je n'ai pas eu trop le temps ces temps-ci, mais je vais aussi refaire des essais sur mon "Arbre de Jade" avec de l'hypochlorite  12,6 % diluée.

 

À bientôt

Patrick

[Tryphon T]

Bonjour Patrick,

 

Ta solution d' hypochlorite de  Na est à ?

 

47% = 14.9 °

50% =  15.85 °

 

Ou bien à 12.6 % ce qui donne 39.75 ° soit 126 000 ppm

 

C'est un ou les autres.

 

Dans tous les cas, il faut donc sérieusement diluer ! Attention les yeux !

 

Pour rappel les berlingots de Javel à diluer sont à, 9.6° soit 39.3%

 

Amicalement.