Dominique.

Jean Marie , il manque en effet un bout d ‘explication - ‘ L’ ensemencement se fait au milieu de la Boite de Petri en enlevant à la pointe couteau le volume d’un grain de mais et en remplissant le trou avec la pulpe de pomme infectée A 18° on voit dès le lendemain les hyphes se développer - à l’étuve à 25 ° c’est encore plus rapide L’extension de fait de manière plus ou moins centrifuge ( j’ai une belle photo mais j’ étais au-delà des 800 ko réglementaires ) - Mpx , les boites doivent être refermées rapidement car la contamination aérienne parasite est très intense d ès qu on s intéresse un certain temps aux moisissures dans le même endroit . Bien amicalement

Durant l’hiver la visite au fruitier permet de constater que certaines pommes se mettent à pourrir. Etude de la Pulpe contaminée L’exploration de la zone contaminée montre que les hyphes de la moisissure envahissent l ‘espace cellulaire et inter cellulaire de la pulpe A un grossissement de 400 on distingue nettement cet envahissement par les hyphes Les secrétions enzymatiques des hyphes aboutissent à une perte de l’ adhésion entre les cellules et à un modification chimique de l’ intérieur des cellules - d’où le caractère mou de la pomme pourrie et sa couleur brune . Si on regarde la préparation on découvre des conidiophores - reproduction asexuée - - avec un grand nombre de spores - ce développement est situé dans les espaces cellulaires et inter cellulaires de la pomme ( je pensais qu on ne trouvait cette forme qu’une fois le mycélium arrivé à l’ air libre – le prélèvement a bien été fait en profondeur ! ) - mais la structure des conidiophores est dans ce cas très particulière. Coloration bleu coton lactophenol (x 400) A comparer avec la forme aérienne de la fin de cette présentation (A noter qu ‘ il existe une autre manière de fabriquer les spores (forme sexuée ) au sein de la masse cellulaire –les Zygospores -mais je n’ai rien trouvé dans cette préparation - ) A qui appartiennent ces hyphes ?–Pour répondre il faut faire se développer la forme aérienne. L’enquête va commencer la fabrication du milieu PGA – méthode personnelle Cuire 200 g de pomme de terre coupée en petits carrés avec la peau dans 1 litre d’eau Durant ¼ d heure - fragmenter les morceau grossièrement et remuer puis filtrer - à travers un torchon - ramener à 1 litre en ajoutant de l’eau - Mettre ce milieu dans un bocal à stérilisation ( comme pour les conserves de haricots verts ou autres ) et stériliser à la cocotte minute durant 1 heure Après la stérilisation on prélève 500 cc – (on congèle le reste pour plus tard) et on ajoute Glucose 10 g –Agar 10 g Nouvelle autoclavage de ½ heure dans la cocotte minute - à 110 ° ( personnellement une fois le milieu autour de 50° j’ ajoute 5 cc d ’ engrais liquide pour hortensia (apport d’Azote et acidification du milieu ) Répartition du milieu dans les boites de Pétri - ou couvercle de bocaux à stérilisation Au bout de 4 jours la boite fermée étant laissée à la température de la pièce on découvre une jolie culture Avec un bistouri – on découpe de fines lanières qui sont transportées sur un porte objet et mise sur la tranche , le but est d’éviter de toucher aux structures aériennes ( la technique du drapeau de scotch sur une cure dent est aussi utilisable) Traitement directement sur la lame -Alcool 95 (agent mouillant) -Bleu coton lactophenol (laisser agir 1minute) Adjonction de Lactophenol avant de mettre la lamelle puis de comprimer un peu. Etude de l’image et mesures Thalle bleu -verdâtre Pénicille long –tête en cylindre Structure verticillée Conidiophores isolés ( 50-500µm) Lisses Metules en verticille 2 à3 (12µm) Cylindriques Phialides en verticille 2 à 4 Cylindriques ( 12µm) Conidies (+/-) elliptiques Lisses ( 3 à 5 µm) Hypothèse : Penicillium expansum (Ref : moisissures utiles et nuisibles B Boton et coll. - Masson 1990)