Dominique.

La levure de boulanger (ou de bière son autre nom ) Préambule Un aspect technique sur ce sujet déjà été traité dans ce forum- -ici- et ici Cette présentation l’ aborde sur le mode aspect anatomique. La levure de boulanger - sous son air populaire est une des plus grandes stars de la biologie moderne - Cet eucaryote est utilisé depuis plus de 50 ans comme modèle d’ étude - Les publications sur ses particularités sont de plusieurs milliers par an . Mais sa rencontre, pour un néophyte, ne va pas être aussi facile que prévue . Premier pas aller chez le boulanger acheter 50 grammes de levure fraîche - Le premier abord est un peu décevant l’ aspect est celui d’ une masse grise friable d’ odeur fade. La mise en culture se fait simplement ( Principe : diluer quelques morceaux dans un peu d’eau et ensemencer une boite de Petri ). Préparation du milieu de culture Mélanger en agitant longuement 5 g de levure de boulangerie avec 100ml d’eau et un cube de bouillon de boeuf . Porter à ébullition pendant quelques minutes . Ajouter 20 g de sucre en poudre et compléter à 1 litre avec de l’eau . Bien mélanger Reporter à ébullition pendant quelques minutes -( cette manière de faire va transformer le saccharose en glucose et fructose - ce qui ici n’est pas bien important - par contre pour les etudes de biochimie il faut se reporter au protocole de Didier Pol voir références ) . Filtrer avec un filtre café (utiliser un filtre permanent de cafetière électrique+papier filtre - sinon c’est galère). Prélever 100 ml de ce bouillon et y mélanger une feuille de gélatine alimentaire ( 2grammes ) découpé en petits morceaux ( ceci est la formule de Didier Pol )–mais le résultat est meilleur à mon avis si on utilise l’ Agar à raison de 1 g pour 100 cc ) Porter à ébullition jusqu’ à dissolution complète de la gélatine ou de l Agar et laisser refroidir un peu. Verser le milieu dans les boites de Petri 20 cc par boite et placer au réfrigérateur jusqu à gélification du milieu (Ref). Mise en culture Mélanger 1 g de levure de boulanger avec 100cc d’eau tiède et 1 g de sucre Bien agiter et laisser reposer 1 heure. Prélever un peu de cette suspension, avec un compte goutte après l’avoir bien agitée Mettre une goutte de la suspension dans 1 litre d’eau - bien agiter . Avec un autre compte goutte prélever un échantillon de cette suspension diluée . Ouvrir la boite contenant le milieu et toucher la surface du milieu avec l’extrémité du compte goutte en une dizaine d’endroits différents (Ne pas laisser tomber de goutte si possible) refermer le couvercle . Laisser la boîte à température ambiante dans un endroit tiède . Premier aperçu 72 heures après. La forme des levures Les levures sont comparables à des ballons plus ou moins de type rugby La taille d’une levure : est assez variable allant de 5 à 12 µm en longueur et 5 à 9 µm en largeur . La levure est donc la plus petite des cellules eucaryotes ; les cellules de levure ont une taille nettement inférieure à celle des plantes et des animaux .la photo 1 ci-dessous met en évidence la taille respective d’une bactérie et de levures - le fait marquant est leurs variétés de formes et de tailles . L’ observation au microscope constate que la grosse vacuole centrale peut jouer le rôle de loupe - et souvent à travers celle-ci on peut voir danser les bactéries qui sont justes au dessous et que l’on pourrait croire être à l’ intérieur de la levure . Les parois Les parois des levures sont épaisses , elles peuvent représenter de 6 à 30 % poids de la cellule Cette paroi est constituée d’au moins 3 couches. Les deux couches les plus internes sont constituées de polymère du glucose ( le glucane .et le mannane ) la chitine ne représente que 1% de la paroi des levures La coloration au bleu de Nil permet de différencier les 3 parois, colore le cytoplasme en bleu clair et la grosse vacuole centrale en bleu plus sombre .le noyau ?? est légèrement violet . Le Noyau Il est difficile à observer - la vacuole centrale le repousse en périphérie ou le masque. Parmi les colorants le plus efficace est le bleu de Toluidine – mais il y en a sûrement d autres ( j’ai lu que le Giemsa marche bien mais dans cette observation cela n’ a rien donné ) . Le contraste de phase permet par contre de mettre en évidence cette structure plus facilement .

Bonsoir Mpx Cette habitude a été abandonnée – L ‘idée initiale était bonne : le candida profite toujours de l’ espace laissé par les bactéries détruites par les antibiotiques - mais cliniquement cela n’est pas trop gênant ou du moins pas souvent -vu la quantité phénoménale d antibiotiques distribués et la faible fréquence des mycoses secondaires . Cet effet est d’ ailleurs variable suivant les molécules utilisées . La politique maintenant est de traiter non préventivement mais en seconde ligne -ce qui a l ‘ avantage de limiter la résistance des levures aux antifungiques -Les levures posent le même problème que les bactéries - elles se mettent à résister à nos molécules -De ce fait certaines mycoses -( dues au candida entre autres ) - sont désormais difficiles à maîtriser et comble de malheur il n’ y a pas vraiment de nouvelles molécules sans risque d’ utilisation à l’ horizon - Pour la bouche les antiseptiques modifient les équilibres mais le candida ne semble pas en profiter - On ne constate pas plus de muguet chez les utilisateurs de bain de bouche Amitiés

B La forme Mycélienne Cette forme se développe si cette levure pousse dans un milieu pauvre comme celui du sérum sanguin . Protocole: --Demander à l’infirmière de prélever 2 fois 5 cc de sang recueilli sur tube sans anticoagulant . --Cet absence d ‘anticoagulant dans les tubes conduit à la formation d’ un caillot Celui-ci , en se formant en quelques minutes , va consommer le calcium du milieu ( par les facteurs de coagulation ) et va libérer du potassium ( par lyse des globules rouges) . --On centrifuge 10 minutes ce qui sépare hématies au fond du tube et sérum au dessus—Le sérum est prélevé . --Ensemencement du sérum avec quelque spores et mise en étuve 30°c pendant 48 heures . L’aspect change alors complètement : Il s agit de la forme mycélienne du candida . Le candida va fabriquer des hyphes comme les pénicilliums et les autres mycètes . Ces hyphes sont cloisonnés et prennent parfois la forme de raquette (1). A partir de ces cloisons se développent des nouvelles branches appelées articles (2) Ces hyphes vont être à l’origine de plusieurs sortes de spores : - 1 Blastospores - qui vont se multiplier par bourgeonnement formant comme sur l’ image des chaînes -( pseudo mycélium ). - 2 Chlamydospores situés à une extrémité d un hyphe sporogéne . - 3 Aleuriospores qui début directement sur le filament mycélien ( à ce niveau il y a un doute - cela pourrait aussi être la forme anormale d’un début d’article ) . - 4 Chlamydospores intermédiaires . Discussion : Intérêt de ce double aspect : --La levure vit sur les muqueuses - et ne possède aucun moyen de se fixer - .La muqueuse produit un flot constant de mucus qui sert à son nettoyage permanent . Candida a développé la solution à son problème : les hyphes lui assurent un ancrage par une considérable augmentation des surfaces de contact : (photo sur ce forum d’un prélèvement de muguet par olivier Barth : ICI ) --Comme toute les levures l’armement enzymatique est important . Le Candida fabrique une protéine la Candidine qui a une très forte action inflammatoire - ce qui explique la présence de l’ oedeme ,de la rougeur et des démangeaisons *Cette candidine sera aussi responsable de réaction allergique beaucoup plus générales . Classification On parle de Candida mais il y a 871 espèces et variétés répertoriées . En pathologie courante les plus rencontrés sont : Candida albicans Candida dublinensis Candida glabrata Candida krusei Candida tropicalis Le diagnostic est faite en utilisant des milieux chromogènes et des galeries de détermination type Api de Bio Mérieux . Dans cette observation la présence de Chlamydospore oriente vers : Candida Albicans Classification 1. Fungi 2. Ascomycota 3. Saccharomycotina 4. Saccharomycetes 5. Saccharomycetidae 6. Saccharomycetales 7 Candida Pour en savoir plus http://fr.wikipedia.org/wiki/Candida_(genre)

Le candida La levure aux deux visages Les candidas sont des levures commensales de nos intestins et de nos muqueuses - ; ces levures sont d ‘origine maternelle (contamination au moment de notre naissance). Elle vont être avec nous toute notre vie -. Mais cette cohabitation – comme tous les couples - va souvent avoir des périodes orageuses. Ces orages nous en avons tous été les témoins et les victimes . Lors d’une rupture d ‘ équilibre de notre système immunitaire , cette levure va se développer , principalement sur nos muqueuses - mais aussi sur la peau , si elle est maintenue humide - Le candida est à l ‘origine de maladies à l’ aspect très divers rassemblées sous le nom de candidose Le plus souvent cette candidose se révèle par la présence d une démangeaison - et d’une inflammation sur le lieu du développement de la levure ( oedeme parfois très important et rougeur ) . Les colonies sont bien visibles sous la forme d ‘ un enduit blanc – de type yaourt. ) Elle a une prédilection pour les milieux : pH acide 5 à 6 . Les principales localisations sont : ---La bouche : le muguet -chez les enfants (l’acidité locale est apportée par l’alimentation lactée – acide lactique ) :ICI ---La vulve ( les femmes constatent de plus en plus souvent sa présence : conséquence de l’ alimentation , des modes vestimentaires et des techniques de contraception ) ---Le gland (du moins chez les hommes non circoncis, les autres sont protégés de ce désagrément) ---Les plis cutanés (surtout s ils sont profonds en particulier en raison du surpoids) : ICI Mais tous les organes internes peuvent être un lieu de développement du candida . Car partant de l’intestin qui est son lieu naturel d’existence, le candida peut envahir toutes les structures organiques si le sujet est immunodéprimé . Cas clinique : Une femme est venue à la consultation pour démangeaisons vulvaires et pertes blanches épaisses . Avec un écouvillon de coton un prélèvement est réalisé . Ce prélèvement est étalé à la surface d’un boite de Petri contenant le milieu de Sabouraud - la boîte est mise à l’ étuve à 30 °pendant 72 heures. La croissance est rapide atteignant sa maturité en 3 jours . Les colonies sont de couleur crème - légèrement élevées -Elles sont lisses un peu comme une goutte de beurre . Elles dégagent une odeur aromatique douce et agréable. L’examen en épiscopie met en évidence une accumulation de micro colonies. Etude du prélèvement fait au sein d’une colonie A La forme levure Dans cette situation Candida apparaît sous sa forme levure La cellule bourgeonne – (A)- développe une cellule fille –(B)Les deux cellules se séparent C . La levure a une structure ronde à ovale de 4 à 8 µm . Exercice de coloration Les parois sont faites de chitine - qui prend la coloration du Bleu coton - et du Cristal violet (comme le font les bactéries Gram positives) . Le vert d’ Etzold. colore en vert la paroi et le noyau. La coloration à l’éosine permet de constater que certaines levures ne prennent pas le colorant (levures mortes ?) . La levure prolifére par bourgeonnement comme nous venons de le voir - mais parfois la cellule fille ne quitte pas la cellule mère et peut prendre un aspect un peu allongé . Ces formes sont appelées pseudo hyphes (photo ci dessous) . - en 1 la cellule s’allonge - en 2 les cellules restent collées

Merci jean- marie En fait le pain c’est comme le fromage si la flore locale disparaît au nom de l’ hygiène ou de la durée de conservation il y a une perte des goûts ancestraux Mais ces plaisirs sensoriels sont aussi le résultat d un conditionnement durant notre enfance - Nos petits enfants pourront préférer le pain industriel au pain traditionnel à force de ne manger qu ‘ hamburgers ou assimilés à la place de la tranche de pain - barre de chocolat qui a bercé notre première jeunesse . Amicalement

Sur le pain de la boulangerie 4 on trouve 1-2 Cladosporium (forme immergée dans le pain) 3 Cladosporium (forme aerienne) (Cladosporium Cladosporioides ) 4 Penicillium 5 Penicillium (fort probablement brevicompactum ) Le pain est donc bien le lieu de contamination par les moisissures et cela dés la boulangerie La première constatation est que le mucor n’est pas la moisissure la plus représentée sur le pain Rapidement suivons le trajet de la farine Image de droite - 4 grains de blé ont été pris dans un silo chez un cultivateur , juste après la moisson .-La mise en culture constate le développement rapide de moisissures - Un Mucor avec son thalle noirâtre est facilement distingué . -Image de gauche : Prise ( avec toutes les précautions d’ asepsie nécessaire ) dans un paquet de farine d’un grand magasin - et mise en culture sur un milieu de Sabouraud stérile – là encore les colonies mycéliennes se développent très rapidement dont le Mucor ( plaque noir des photos ) Première constatation Toute la chaîne du pain est contaminée : du producteur de blé au consommateur de pain. Deuxième constatation Les moisissures selon les boulangeries ne sont pas très différentes à hauteur de leur Genre - mais l’ examen des penicilliums montre qu ils ne se ressemblent pas – ; il y a donc eu une sélection de l’ espèce suivant le fournil du boulanger où elles se développent ( rôle des microclimats locaux ) . Les boulangeries des 4 villages étudiés existent depuis prés de 100 ans et ont du, comme tout être vivant , sélectionner leurs espèces commensales . Le pain est cuit à haut température : 500gr est cuit 25 à 30 minutes à 240°c . Se pourrait il que l’intérieur du pain –, totalement isolé de la croûte , contienne malgré tout des spores ? . Protocole B Le pain acheté est apporté à la maison - Avec un couteau stérilisé à l a flamme -, mains protégées par des gants à usage unique , la mie du pain est isolée et mise à son tour dans des sacs plastiques - Mise à l’étuve à 18 ° 3semaines : résultats – :La croissance des mycéliums est très faible En particulier ne sont trouvées que quelques colonies de Penicillium sur deux prélèvement et rien sur deux autres ; - ce qui veut dire que la température du four et le temps de cuisson ont réduit le nombre des spores mais ne sont pas suffisants pour détruire toutes les spores contenues dans la farine - ( par contre pas de Mucor ni de Cladosporium ) La contamination principale se fait donc dés la sortie du four en raison de l’ air ambiant du fournil , air chargé en poussières de farine contaminée - Les spores se posent sur la croûte et attendent les conditions optimum de développement - A cela va s’ajouter dans un second temps la contamination aérienne de l’environnement du consommateur - Conclusion : Position du Mucor (thème de la présentation) Le Mucor n’est pas la moisissure la plus fréquente – sur le pain Mais --elle est celle qui se développe le plus vite empêchant les concurrentes de se positionner (du moins dans un premier temps ) - -- elle ne semble pas résister à la chaleur ce qui ne serait pas le cas des pénicilliums De ce fait on trouve le Mucor en contaminant de la croûte via l’ atmosphère du lieu d stockage .S’il y a un peu d’ humidité ambiante - il prendra l’ avantage et c’est lui qui sera le premier visible Cette conclusion n’est valable que pour les boulangeries de ce coin de Normandie Annexes Prenons du pain industriel ,( carré de pain vendu sous le nom de Pain de mie),dans des sachets fermés très rapidement à l ‘usine , après plus d 1mois d’ étuve il ne se développe rien Le pain n’a pas bougé Photo 1 – ci- dessous Pour tester le pain de mie j’ai contaminé la tranche ( photo 2 ci – dessus ) à l ‘aide d un prélèvement sur une culture d ‘ un Mucor jaune . Son développement a été très lent - ,ce qui ne ressemble pas au dynamisme de cette espèce ,- -La formule de fabrication du pain de mie est complexe mais ne contient pas d’antifungique ajouté - juste de l’ acide ascorbique - Ce milieu se révèle donc être nettement moins propice que le pain traditionnel au développement des champignons (à condition d’ un environnement peu chargé en eau ) - L’expérience est simple à faire . - -Qu’elles seront vos conclusions dans votre région ? Et surtout qu elles espèces de moisissures allez vous mettre en évidence sur les pains de vos boulangeries préférées ? Existe il des différences régionales ? Dominique

Le Pain et les moisissures Lors d’une courte discussion sur le Mucor ici Jean Marie se souvenait avoir rencontré le Mucor sur du vieux pain - Ce lien ,entre pain et Mucor ,est souvent constaté - Sur le Net ces deux mots sont souvent associés . - Mais qu elle est la force de ce lien ? Pour le savoir voici une expérience toute simple Protocole A 4 villages avec chacun une boulangerie (espacement 10 kilomètres en moyenne) Achat d’une petite baguette moulée . ( avoir les mains bien propre et compléter avant d’entrer dans la boulangerie avec un gel désinfectant hydro alcoolique ) ) – Dés la sortie du boulanger mettre un morceau de pain dans un sac plastique - , type sac de congélation fermé hermétiquement . ( Précision : avant de mettre le pain j’ avais ouvert les baguettes à la main - pour exposer la mie ) Après 3 semaines dans une étuve à 18 degrés les résultats suivants sont obtenus . Etude au microscope Sur le pain de la boulangerie 1 on trouve 1- Penicillium 2- Aspergillus + penicillium 3- Mucor + penicillium Sur le pain de la boulangerie 2 on trouve 1 -Penicillium 2 – 3 –Cladosporium Sur le pain de la Boulangerie 3 on trouve 1-Penicillium 2-Aspergillus 3-Aspergillus penicilloïdes 4-Cladosporium

Bonsoir Jean – Marie Merci pour ton aide . La photo F correspond à Rhabditida . A partir de ce mot je suis arrivé au site de l 'université de Floride . Après une visite sur le site on peut affirmer qu il s’agit de Pelodera . Ce site est tout à fait remarquable . - (de superbes photos) Amitiés entrée du site ici entrée sur Pelodera ici

La femelle Le corps d’une femelle mature est remplie d’ œuf Les ovaires sont situés à deux endroits du corps de la femelle dans la partie antérieure ( les poches que l’on voit ( photo 3 trait blanc) sont les spermatothéques contenant les spermatozoïdes Un organe identique existe dans sa partie postérieure ( 6 éme image côté droit ) – Ces Ovaires contiennent des centaines d’ ovules qui vont se développer en quelques jours dans l ‘ immense cavité utérine qui s étend sur toute la longueur du corps parallèlement à l’ intestin . Les œufs ( 3 µm x 5 µm ) contiennent les foetus dont la forme est reconnaissable sur la photo 2 - A maturité la ponte se fait par l ‘ orifice vulvaire ( photo 4 ) . Les nématodes sont capable , si les condition de vie sont défavorables d ‘ arrêter leur fonction vitale pendant des très longue période et peuvent ainsi survivre à la chaleur -au froid –à la sécheresse -.Ce phénomène appelé cryptobiose est partagé avec les rotifères et les tardigrades . L’accouchement 4 étapes Photo 1 vers la fin de sa maturation une partie des œufs va directement éclore dans le ventre de la mère - parcourant la poche utérine dans tous les sens ( flèches rouges ) . Phot 2 la vulve se gonfle et le bouchon muqueux devient important Photo 3 l’ accouchement a lieu de manière explosive en quelques secondes Les petits vers passent les premiers puis sont accouchés les œufs non encore éclos comme celui de la photo en train de passer la filière génitale (entre les flèches rouges ) Phase 4 les petits se mettent à nager autour de la mère qui reste étrangement immobile -(conséquence d’être prise entre lame et lamelle ?) . Le système nerveux Les vers ont un système nerveux qui leur permet d’ intégrer les stimuli Ce système est composé d’ un anneau circulaire qui est constitué de 4 ganglions nerveux d ‘où partent 6 nerfs qui s’ étendent vers la zone distale - en particulier l’intestin et les organes reproducteurs - 6 autres nerfs se dirigent vers la bouche ( pas de photo car la mise en évidence doit nécessiter des préparations que je ne connais pas ). La peau ou cuticule (photo 2 ci dessous ) Tout ces organes sont inclus dans la cuticule ( la peau pour nous ) cette cuticule est faite de l’ empilement de 9 couches de fibres - sur la photo on en met en évidence 3 qui se nomment . 1 le cortex - 2 la couche matricielle 3 –la couche fibreuse. La couche 4 est probablement soit la zone hypodermique soit une couche de muscle de structure longitudinale . Cette cuticule très souple et extensible est de grande résistance – elle est aussi perméable à l’ eau et aux gaz si bien qu elle est l’ organe de la respiration . Enfin pour terminer cette présentation la photo 1 ci-dessus montre les vers qui viennent de naître – on constate qu ils n’ ont aucun attribut sexuel - Ils devront passer par 4 mues avant de prendre leur forme adulte . Taille à la naissance 25 µm sur 2 µm . De quel vers s agit il ? Si on prend la bouche comme élément de détermination on trouve dans Das Leben im Wassertropfen de Streble et Krauter. Pelodera Chitwoodi (p 309) Ce qui donne comme classification Embranchement Nematoda Classe Secernentea Odre Rhabditia Famille Rhabditidae Genre Pelodera Espèces - il y a un doute La détermination précise des nématodes nécessitent une littérature universitaire ( il est estimé entre 800000 et 1 million d’ espéces ). Discussion Mais d’ où vient le vers ?- En fait il ne vient pas du chien - mais de la terre -Il y a deux ans j’avais sur cette plate bande de jardin cultivé des radis noirs dont certains étaient crevassés - leur examen m’avait déjà fait rencontrer ce nématode dans les crevasses - - ensuite j’y ai placé des salades - et ne me suis plus intéressé à ce petit animale jusqu à aujourd'hui . Pour en savoir plus Le sujet est monstrueux -pour commencer ici Si vous être intéressé je peux vous faire parvenir un peu de mon élevage - le vers n’ est pas exigeant mais il faut un chien pour préparer la base du milieu de culture : :D/> Dominique

L ‘anus est situé sur le côté à l’ extrémité caudale du moins chez la femelle . Pour le mâle il ne faut pas parler d’anus mais de cloaque puisque les voies génitales et l intestin se terminent chez lui au même endroit . Le système excréteur Il apparaît au dessus et - au dessous de l’intestin sous la forme d ‘ un long canal sinueux Il existe en fait deux canaux diamétralement opposés qui viennent t de l’arrière du vers se dirigent vers l’avant pour émerger en arrière de la bouche . Les nutriments vont passer à travers la paroi de l’intestin vers les différents organes périphériques ( ces organes baignent dans une structure appelée pseudocoelome ) Les déchets ( surtout urée et acide urique ) sont repris pas ces canaux excréteurs - -Les variations de pression osmotique sont probablement le moteur du mouvement des fluides . La reproduction Chez la plupart des vers la reproduction est assurée par un couple - mâle / femelle . Mais il existe des vers hermaphrodites qui produisent par auto fécondation une descendance hermaphrodite . La reproduction est très rapide : temps de gestation 3,5 jour à 20 °. Le Mâle Le testicule est très long il débute presque derrière le pharynx et se termine à la queue parallèlement à l ‘intestin La photo de droite montre que le testicule est rempli de petites granulations de la taille de 0,4 µm. A la queue de vers se trouve le système génital .Chez le mal il existe deux spicules ( photo 1-2-4 ) très acérées qui vont servir à maintenir la femelle de façon à mettre en contact la vulve et l’ orifice génital mâle le temps du transfert du sperme Les spermatozoïdes n’ont pas de flagelle et se meuvent grâce à des pseudopodes . La queue est ornementée de 4 paires de protubérances disposées parallèlement (photo 3)

Les crottes et ses recycleurs 2 ème partie les vers Première partie ici Deuxiéme partie L’ examen à la loupe binoculaire fait découvrir de très petit vers - qui vivent sur la couche externe des crottes et ne la pénètrent que du tiers inférieur de leur corps - Leur élevage est très facile - (- Crotte + eau +consistance boueuse ) ce qui donne le temps de les regarder vivre et surtout d’ être surpris par leur vitesse de multiplication Mais faisons connaissance. Le mâle La femelle (La couleur rose est du à l’utilisation de Lacto fuscine) Etude anatomique de ce nématode Les nématodes sont de petites créatures – certaines comme celles présentées ici ont moins de 1 mm de longueur – de structure circulaire elles ont cependant de nombreux organes à l ‘ exception d’un système pulmonaire et d’un système vasculaire Schéma explicatif icipour suivre la progression de la présentation Le Système digestif . La tête du vers est très petite il s’agit surtout d ‘une bouche - suivie d’un tube peu musclé . Ces trois images :montrent que l’ interprétation d’une forme spatiale avec une reproduction plane est délicate - Sur ce vers il existe en fait 3 lèvres qui conduisent à un couloir rectiligne -- Sur ces lèvres la photo 3 fait deviner la présence de poils mais on ne trouve pas de dent sur ce spécimen . Il n’existe pas de structure musculaire forçant la nourriture à pénétrer . Le moteur du système digestif est en arrière - ce que l'on appelle le Pharynx Deux zones sont distinctes . ( photo ci-dessous) Zone 1 Cette zone est formée d’un canal central entouré par de puissants muscles Zone 2 D’ aspect sphérique cette structure , elle aussi très musclée ,contient en son centre une chambre triangulaire – bien visible sur la photo- de gauche ( - sur cette photo le vers a été nourri avec une nourriture colorée à l’ éosine ) La musculature est le moteur du système digestif qui travaille comme une pompe aspirante ( les aliments sont aspirés à travers la bouche , subissent un transfert rapide vers la chambre pharyngée qui refoule la nourriture vers l intestin grâce à la présence de deux valves dentées ( photo ci-dessous ) . Sur cette photo les valves d’ aspect arrondi forment un clapet de non retour L’efficacité du système est stupéfiante ; il a été fait des mesures de pressions à l’intérieur de l’ intestin .Chez les nématodes les pressions atteignent 70 mm de Hg avec un record dans certaines espèces de 125 mm Hg - ce qui est le chiffre de la pression artérielle chez un homme adulte. C’est cette pression qui va donner au vers sa forme ronde et cylindrique et assurer le transit à travers le long tube intestinal Elle permet aussi l’élimination des déchets pas l’ anus . L’ intestin court d’ une extrémité à l’ autre du vers - Mais sa position centrale varie suivant les individus ( comparer cette photo avec la première ) . Derrière le pharynx débute l’intestin qui y est adjacent photo 2 . Ce qui frappe ,surtout si l’animal n’a pas trop mangé , est la présence de granulations photo 3 Au plu fort grossissement les granulations semblent avoir une structure radiée de type cristalline Nature ? Les vers se nourrissent de bactéries ( une bactérie fait 1 µm - la taille est un peu inférieure bactéries lysées ? . )

Merci a tous les deux Il existe un lien serré entre pain et mucor -nombreux sont les sites sur le net qui le confirment pourtant les choses ne sont pas ce que l on croit……… ( sujet du mois de janvier 2013 ) Amitiés

X 800 (Taille des spores de forme elliptique et lisse 10-12 µm X 3-8µm) X 800 ornementations du sporocyste qui est finement echinulé Etude de la partie immergée Les hyphes entre 6 et 12 *µm Les chlamydospores sont peu abondants –Les hyphes ne sont pas septés ou peu . Il s’agit de Mucor Circinelloïdes mucor Classification 1. Fungi 2. Zygomycota 3. Mucoromycotina 4. Mucorales 5. Mucoraceae 6. Mucor Annexe Intérêt industriel du mucor Circinelloides pour la production d’éthanol Mucor et pathologie humaine -ici- Une grosse mouche vole péniblement dans la cuisine - - attrapée elle est placée dans un flacon stérile - elle y meurt peu de temps après . Je la place au centre d’une boite de petri contenant une préparation de Sabouraud . 2 jours après apparaît une moisissure qui est un mucor et 8 jours après une seconde dont la couleur bleutée révèle la présence du penicillium expansum . Conclusion cette mouche en tournoyant dans les airs est devenue porteuse de spores mycéliennes - et en particulier celle de mucor et de penicillium . Discussion Sur le Web les images de crottes sont peu nombreuses mais elles sont remarquables : elles sont toujours le lieu de développement des Mucors . Pourquoi ce champignon et pas un autre ? 3 possibilités --1 la mise en culture de la mouche nous a montré quelle était porteuse de spores de Mucor - or les mouches adorent les crottes - ( nourriture et logement pour ses œufs ) . --2 -Les mucors sont des champignons très fréquents - leurs spores innombrables sont soulevées par les mouvements d air - leur dissémination est très rapide . -- 3 -- La Biologie des mucors nous donne une réponse -on peut lire dans le livre de P Bouchet et coll. : P 44 « les sporocystes , entourés d’une épaisse cuticule et d’une couche gélatineuse , adhérent aux brins d’ herbes .Avalés par les ruminants leur paroi ne se résorbe que dans le tube digestif : les spores seront libérées avec les excréments et germeront à leur surface « .On voit souvent les chiens manger des brins d’ herbe - par ailleurs les croquettes ont une charge végétale importante et sont à la base de l’ alimentation des animaux de compagnie . Seconde partie les vers -à suivre

-Les sporocystes :Ils ont entre 20 et 80 µm de diamétre A noter le rétrécissement du conidiophore à sa partie terminale La columelle La columelle peut atteindre 50µm – mais sa taille est très variable elle est obovoïde parfois sphérique (en 3). En (1) il existe sur la columelle un résidu de la membrane du sporocyste - cette membrane résiduelle est plus visible en contraste de phase (2) . En 4 cette image est très souvent rencontrée et semble être un sporocyste stérile .On y voit l’hyphe et un début de columelle mais pas de spores à l’intérieur . Ces trois images sont souvent rencontrées dans les colonies de mucor et me posent des problèmes d’interprétation - En effet 1 et 2 pourraient être des columelles avec un sporocyste ouvert mais la photo antérieure montre que la paroi du sporocyste se déchire de manière aléatoire et non régulière - Si 1 et 2 sont des sporocystes stériles on ne voit pas le columelle par transparence comme sur la photo 4du dessus . La photo 3 montre par comparaison un petit sporocyste . Les spores

Lors de la promenade matinale dans le jardin j’ai trouvé sur la pelouse une tâche blanche veloutée L’aspect était celui de ce que les chasseurs appellent un fumet : Celui de Rubanne le chien de la maison . Cette masse organique est un bonheur pour les insectes les acariens ,les vers les moisissures les bactéries - en fait les recycleurs . –Les moisissures en premier puisqu’ elles n’ ont pas le matériel biologique qui leur permet de fabriquer les molécules dont elles ont besoin ; la source de ce matériel étant la matière organique en décomposition . Dans cette première partie on s intéresse à cette moisissure blanche Dans la seconde on découvrira les vers. Ce n’était pas la première fois que je me trouvais devant -mais l’ observation du phénomène sur plusieurs mois montrait que l’ aspect macroscopique était toujours le même : de longs poils blancs couvrant la masse . Qu'elle moisissure colonie ces crottes ? Première étape la mise en culture sur milieu de Sabouraud Image obtenue après 8 jours d étuve à 18 ° (ensemencement 3 points) Le revers de la boîte est de couleur crème . Sur le milieu de culture les conidiophores restent très courts alors que sur le milieu naturel ces conidiophores atteignent plus de 2 cm . La photo de gauche montre la présence de ramifications courtes terminées pas un petit sporocyste Ces sporocystes sont blancs à jaunâtres en début de formation puis gris noirs à maturité . Divers aspect de cette moisissure Partie aérienne -Ramification sympodique des conidiophores

Merci Jean –Marie Il faut parcourir les routes de campagne ; les accidents entre animaux et voitures sont légions – depuis les petits animaux aux très gros – comme les biches et surtout les sangliers ( dans ce cas il est rare que la voiture reparte ) - Pour les vaches comme elles se frottent aux clôtures en barbelé il suffit de les récolter ( de même pour le mouton ) Il s’agit donc d’un sujet où il est seulement nécessaire de se pencher Amicalement

0,30mm 0,21 mm L ‘homme dés sa vie intra utérine a des poils et des cheveux dont la mélanisation se fait de manière continue – La photo de l’ enfant de 7 jours montre la chevelure développée les derniers mois de sa vie in –utero A l’age adulte le centre de la médullaire présente une zone plus densément mélanisée mais la totalité de la médullaire est intéressée Par contre en vieillissant la charge mélanique diminue pour avoir presque disparu chez l’homme dont la chevelure est devenue grise La police scientifique a mis au point l’ indice médullaire c’est à dire le rapport entre la zone fortement mélanisée –( diamètre moyen médullaire ) et le diamètre moyen du cheveux Chez les humains cet indice est généralement inférieur à 0,38 chez les animaux il est supérieur à 0,50 ( reste une fourchette d’ indécision ) Une affirmation très souvent rencontrée sur le Net est que le cheveux devient blanc parce qu il ne contient plus de mélanine A la place des bulles d’ air il y aurait des bulles d’ air Voyons les faits sur mes cheveux blanc examen en CP ( contraste de phase) et en fond clair à X 800 On constate sur les images de droite un ’axe médullaire qui ne contient presque plus de mélanine ; il reste par contre un squelette protéique entortillé Sur les images de gauche on découvre bien quelques bulles d air marquées par les flèches rouges - mais elles sont infimes par rapport à la taille du cheveux Conclusion le cheveux est blanc par perte de mélanine mais non par présence de bulles d’ air .La couleur est la couleur des keratinocytes En fin pour finir cette présentation qui pourrait n’avoir jamais de fin - Une dernière photo ( par esprit de clocher ) Annexe Question de l’ inspecteur qui demande au médecin légiste  --- A qui appartiennent ces poils? Réponse ci dessous Réponse --A la chimie de synthèse ! Amicalement Dominique

B L’écureuil est un animal de transition parce que 2 types de poils sont présents Poils du ventre et petits poils prés de la peau 0,060 mm 0,080mm Poils du dos et des pattes - ici on présente deux parties du même poil Ce qui permet de constater combien la taille du poil varie en fonction du moment de sa formation Partie interne (prés de la peau ) Partie externe du même poil qui donne la couleur à la robe de l’animale 0,122 mm 0,160 mm Donc l’écureuil développe des petits poils avec une charge mélanique repartie de manière rythmique et des poils plus volumineux à partir de 0,120 mm ou la charge est continue Les deux dernières photos montrent qu il existe deux types de mélanine : la noire ou eumelanine et la marron / roux ou phemelanine Ces deux types de poils vont se trouver chez de très nombreux animaux comme le renard – le chien - le lapin le chat etc. Deux remarques L’ examen du poils du renard et de l’ écureuil montre un phénomène, de transition brutale En effet dans la partie initiale de sa formation le poil ne possède que la mélanine rousse ; ce n’est qu e vers la fin de sa formation que l’ eumelanine apparaît -( la zone prés du corps de couleur noire ) L’ examen de la coupe de poil de chien – montre que toute la medullaire du poil est mélanisée et pas seulement l’ axe central comme sur la coupe de poil de taupe -( le fond de la photo est étrange mais un poil se coupe très difficilement -Pour le bien couper je mets un peu de super glu sur la face de coupe du bloc de paraffine - sinon le poil a tendance à glisser : cuticule du poil /bloc de paraffine n’ adhèrent pas de façon satisfaisante - d’où l’ image d ‘ arrière plan ) 0,150 mm 0,140mm C Les gros animaux - dont l’ homme ont des poils de tailles différentes mais la mélanisation est permanente dans le constant - 0,09 mm 0,158

Le poil (seconde partie) Résumé de la première partie -- http://forum.MikrOscOpia.com/topic/12194-le-poil-variations-sur-le-theme-la-taupe-n1/?hl=poils Le poil de la taupe (article initial) est le lieu d ‘ un curieux phénomène : celui de l activité rythmique des mélanocytes au cours de l injection des particules de mélanine contenues dans les melanosomes vers les keratinocytes Mais qu en est il chez les autres animaux? – cette présentation va se centrer sur quelques habitants de la région (milieu très rural de l’ Eure) Toutes les photos sauf les coupes histologiques ont été prises au grossissement 300 Plan Les petits animaux - L’ écureuil comme animal de transition Les gros animaux dont l’homme A Les petits animaux - les poils ont des tailles autour de 0,080mm à 0,160 mm Sont présentés : Chauve souris –Souris- Taupe –Musaraigne – Fouine – Rat 0,080 mm 0,080mm 0,09 mm 0,09mm 0,120 mm 0,120 mm Chez ces petits animaux on ne trouve qu une seule forme de poil La médullaire est structurée par une formation rythmique ,plus ou moins importante de mélanine Cette coupe de poils de taupe X 800 présente la répartition de la mélanine très dense au centre les granules mélaniques se dispersent en allant vers la périphérie

Merci Jean-Marie J ‘espère faire une seconde partie à cette présentation ; elle se fera au printemps -si j’ arrive à faire se développer les sclérotes , à mette en évidence les pézizes et à faire pousser Botryotina - Si quelqu un a une expérience du processus son aide serait bien venu Amicalement

( contraste de phase X 400 – pas de coloration ) - B zone médullaire medula Le centre (zone 2) représente la formation initiale du processus d agglomération des hyphes les uns contre les autres. Elle -est de faible densité dans cette zone -les structures allongées rappellent leur origine hyphale mais la structure reste anarchique . Rapidement il y a une forte densification des hyphes ( Zone 3 ) qui s’agglutinent étroitement - les uns contre les autres – la consistance d’ un sclérote est d’ ailleurs dure au toucher La coupe ( comme une tranche de saucisson ) montre que les hyphes sont couchés les uns contre les autres - donnant cet aspect de section ( semblable à celui obtenu pas la section d un câble de fil de téléphone ) ( contraste de phase x 600 pas de coloration ) Evolution des Sclérotes Les sclérotes étant l agglomération d’ hyphes - il est possible qu ‘ au sein de cet amas se forment des interactions entre hyphes de polarités différentes - donnant une reproduction sexuée - cela se manifestera par l’ apparition sur le sclérote de pezizes lorsque les conditions de germinations seront revenues Ces pezizes ( page 31 du lien ) contiennent des asques – d où la classification du Botrytis dans la division des Ascomycota – la forme parfaite de Botrytis est Botryotinia (L’ anamophe étant le Botrytis –même champignon mais deux formes) Ces sclérotes peuvent aussi germer sur le mode mycélien et redonner, naissance à des conidiophores Loin d ‘être vides les hyphes contiennent de nombreuses substances - les sclérotes peuvent être utilisés pour l extraction de produits chimiques - la plus connue est le sclérote du seigle ( ergot du seigle -Sclerotium clavus dont on extrait divers alcaloïdes point de départ de médicaments à visée vasculaire anti migraineux Classification Règne Fungi Division Ascomycota Sous division =Pezizomycotina Classe Leotiomycetes Ordre Helotiales Famille Sclerotiniaceae Genre Botrytis Espéce Botrytis Cinerea Discussion Est ce que le sclérote est issu des hyphes d’une seule spore ou est ce que cette formation correspond à un travail collectif ? Un élément de réponse apparaît si on considère le developpement de la moisissure sur le végétal ; une spore est à l ‘origine du processus La grande vitesse de reproduction par la voie de la reproduction asexuée crée une grande quantité de clones - toutes les spores ont le même patrimoine génétique : Le sclérote serait donc l’expression du patrimoine génétique de chaque spore - mais ne pourrait se construire que grâce à la puissance d’un groupe clonal volumineux L’expression de cette potentialité ne se fait que dans certaines conditions physico chimiques - puisque sur 5 poivrons atteints seul 1 présentait ces formations . ( par contre sur milieu de culture la formation est constante - du moins dans cette étude ) Annexes Les hyphes des champignons inferieurs ont tendance à se regrouper , nous venons de le voir avec la formation des slerotes - mais il existe un autre exemple avec les corémies ( page 6 du lien ) Le regroupement des hyphes en faisceaux est la règle chez les macromycétes ( mais dans ce cas issus d’une seule spore ) Image de la section d une tige de macromycéte Contraste de phase – bleu coton – X 400 ( section de 10 µm - après inclusion dans paraffine ) Pour aller plus loin Pénétration dans la plante et invasion de l’hôte http://ephytia.inra.fr/tabac/tabac_utilisateur/index_appli.php?portail=Grandes%20cultures&produit=tabac&main=3&ssrub1=28&ssrub2=60&ssrub3=65&id_fiche=52&theme=178 Botrytis et la vigne http://mycologie.univ-lyon1.fr/site%20myco/maladies/botrytismain.htm Les botrytis - http://fr.wikipedia.org/wiki/Botrytis

Image en episcopie Aspect d’ un sclérote en formation -. Cette image a été obtenue suite à un ensemencement de spores dans une boîte de Petri -sur milieu de Czapek après 10 jours de culture à 20 ° ( on constate que le sclerote est d’ abord blanc avant de devenir noir ) Episcopie Coupe au microtome d’un sclérote après inclusion dans la paraffine -( - Bleu coton x 200 fond clair ) On constate que le sclérote est constitué de deux zones - A Zone corticale - cortex - zone 1 la coupe montre des structures qui pourraient faire penser à des cellules mais qui sont en fait la section des hyphes positionnés plus ou moins parallèlement – D’ abord blanche cette couche superficielle va se mélaniser donc devenir noire protégeant ainsi l ‘intérieur contre les UV -

Botrytis et les sclérotes Cette année les cultures sous serres ont beaucoup souffert de la Pourriture Grise les courgettes - les concombres et les poivrons - la raison tient à une ambiance humide et plutôt fraîche C ‘est sur le poivron que la présentation de la Pourriture Grise est la plus intéressante car elle apparaît de manière bien visible 1 sous sa forme d’expansion le mycélium et les conidiospores 2 sous sa forme de résistance : la sclérote A- la forme d’expansion Le mycélium a des hyphes plutôt blancs tournant au grisâtres Fond clair – bleu coton – X 400 Contraste de phase - bleu coton –x800 Analyse des images Thalle blanc puis gris Conidiophores grands et dressés 2 mm et plus - ramifiés vers le haut où ils présentent des renflements - ces renflements portent de conidies solitaires unicellulaires - présence d’une courte denticule qui relie la conidie au renflement Conidies ovées 8-15 X 6- 10 µm La pourriture grise est due à Botrytis Cinerea B la forme de résistance : les sclérotes De l’ extérieur du poivron rien de visible - il faut l’ ouvrir pour découvrir sur la face interne du fruit des structures noires - allongées - qui peuvent atteindre ici 3 cm de long - et qui pour les plus petites ressemblent à des crottes de souris ( la présence des sclérotes est très aléatoire -il a fallu ouvrir 5 poivrons atteints avant de trouver les sclérotes )

Merci Ldv

Mycologie : -Expérience de culture ( ou la prise de conscience des difficultés ) Dernièrement, pour réaliser la présentation de l’oïdium sur la Berce commune, j’ai mis en culture des fragments de feuilles de Berce. Sur une boite de Pétri contenant 20 cc de milieu PDA (pomme de terre – dextrose –agar) j’ai placé 3 petits fragments de feuilles obtenus en utilisant un petit emporte-pièce. -(fragments placés - à 12 heures 6 heures et 9 heures de chaque boite) 4 boites ont été préparées. Les boites de Pétri sont laissées à température ambiante pendant 3 semaines Le résultat est assez étonnant et je vous soumets les photos Ce qui frappe c’est le nombre de colonies mycéliennes différentes qui se sont développées. Il n ‘a pas été mis d’antibiotique dans la préparation de ce fait les colonies bactériennes se sont aussi développées ( les colonies lisses des boites ) .La couleur de ces colonies correspond en partie à la couleur des hyphes mais surtout à la couleur des conidies ( plusieurs millions par colonie ) Les différences morphologiques entre les boites sont très importantes ; pourtant la seule chose au départ qui les différenciait a été le lieu de prélèvement sur la même feuille de Berce . Photo 1 Photo 2 Photo 3 Photo 4 Première approche au microscope On va se limiter à la présentation de deux familles Prélèvement ( 1-2) de la boite 1 – zone rose et zone blanche ---- X800 – Bleu coton – fond clair - Aspect d’une Macroconidie Rouge Congo –X800 – Contraste de pH Cet aspect est celui d un Chlamydospore Dans le prélèvement 1 le thalle est rose et dans le 2 le thalle est blanc mais le mycélium est le même Cet aspect est celui d’un fungus du genre Fusarium ( les espèces de ce genre vivent souvent dans le sol mais peuvent être phytopathogénes - ou parasites de l’homme ou des animaux - producteur de toxines ) La situation devient plus complexe dans le prélèvement de la zone 3 de la boite N° 2 X400 – bleu coton – fond clair Les spores 1 sont hyalines et de petites tailles, Elles proviennent probablement des aspergillus présents Les spores 2 : ces spores de couleur bleue sont probablement une micro conidie de la colonie de fusarium blanche qui est juste au-dessus de notre zone de prélèvement ( l’image précédente a présenté la forme macro conidie de ce fusarium ) Reste à interpréter les grosses spores 3 - Nature ? - La situation devient ingérable en dehors de la mise en culture de chacun des constituants de façon à obtenir une culture pure , seul moyen pour faire une description sans discussion des différentes structures d ‘une espèce. Dans la boite N° 3 (prélèvement 4) Bleu lactophenol flond claire X ---- Autre aspect coloration rouge Congo – X600 fond claire Il s’agit d un aspergillus . 2 formes : jeune en haut et formes plus âgées en dessous Tête conidienne avec métule et phialides (bisériée) – le thalle a une couleur vert- olive , le conidiophore est verruqueux cela évoque Aspergillus Flavus Espèce très répandue (Synthèse d’antibiotique – et de composés toxiques carcinogènes : les aflatoxines) Conclusions Sur une feuille de plante notre attention est d ‘ abord attirée par la présence d’une colonie dominante ( dans le cas présent l’oïdium de la Berce : Erysiphe heraclei ) ; Mais il existe les spores de plusieurs mycéliums ( dans le cas présenté pas moins de 12 colonies de couleurs différentes ) qui ne se sont pas développées sur la feuille -soit par effet de concurrence soit parce que le vent , la pluie, les insectes les ont déposées sur la feuille qui est impropre à leur développement. La culture leur offre par contre une possibilité nouvelle dont elles vont bénéficier Dans ces cultures la difficulté pour identifier chaque colonie vient de ce que les hyphes sont intriqués. La seule solution est de refaire des milieux de cultures et d y repiquer un micro prélèvement de chacune –Comme la durée du survie des spores est très longue -il est possible de prendre son temps On constate aussi l ‘ intérêt d’ajouter un antibiotique surtout si la croissance des mycéliums est longue, encore que cela ne semble pas réellement gênant du moins à notre niveau d’ étude . On prend aussi conscience que l’ étude d un champignon qui se développe à l’ intérieur d’une feuille nécessite d' abord de stériliser la surface de cette feuille en lui faisant subir un bain à l’eau de javel avant de couper des morceaux et de les repiquer sur un milieu de culture Annexe Si on ouvre Microfungi on land plants de Martin et Pamela Ellis on découvre que sur la Berce a été décrit 12 espèces spécifiques de cette plante (page 367) Sur la feuille Puccinia heraclei- Erysiphe heraclei –Phloeospora heraclei –Ramularia heraclei –Taphridium umbelliferarum Sur les fruits Symphyosirinia heraclei Sur les tiges mortes Dactylella arnaudii- Phoma complanata –Phoma longissima –Pitottaea nigrostriata – Pyrenopezia chailletii – Stachybotrys cylindrospora – Et il a été noté dans les publications - non spécifiques à cette plante mais pouvant s’ y développer plus de 40 espèces différentes – dont Fusariella hughessi