Dominique.

Dans une précédente présentation Thibault ,nous a fait découvrir le processus de la mycorhization et a développé un exemple d’ endomychorize - celui de Globuse sur les racines de pois Cette observation pose la question de l’interaction entre les champignons et les plantes vasculaires . Cette interaction se développe dans les quelques centimètres d humus qui couvrent les bois et les forêts Au cours de l’ évolution cette proximité étroite a conduit à l’apparition de divers types de relations Il existe d’ abord une simple relation de proximité - les hyphes courent dans l’ humus sans intervenir avec l’ entourage - prélevant dans les amas de feuilles et de bois -mort les éléments carbonés dont a besoin le champignon . Une coupe de ces hyphes découvre un système qui rappelle les fils téléphoniques par la multitude des fibres incluses dans un même câble Il existe ensuite une relation plus étroite mais de simple voisinage où les hyphes vont utiliser les radicelles et les racines comme support au cours de leur pénétration commune de l’ humus . Il existe enfin deux systèmes d’interactions entre le fungus et les plantes de proximité - l’ ecto.mycorhize et l’ endo mycorhize Voyons surtout l’ectomycorhize Définition de l’ ectomycorhize selon l’article de Wikipedia « Les ectomycorhizes sont des associations fréquentes entre les arbres des régions tempérées (comme les Fagacées, les Pinacées ou les Bétulacées) et des champignons de la division des Ascomycètes, des Basidiomycètes ou des Zygomycètes. Le champignon s’associe d’abord aux racines fines à croissance déterminée, dépourvues de poils absorbants. Puis, il enveloppe la racine d’un manteau d’hyphes, le manchon mycorhizien. » On compte autour de 5 à 6000 espèces de champignons qui ont un comportement mycorhizien ( Russsules Bolets , Lactaires Chanterelles Truffes etc ) Pour illustrer cette affirmation je me suis rendu dans le bois du voisin - riche en chênes Les prélèvements se sont faits sur des petits chênes de 2 ans – Ils sont extrêmement n ombreux aux pieds des grands chênes et la grande majorité ne se développera pas sauf si l arbre porteur des glands disparaît. La photo permet de constater que les mycorhizes sont de très petites tailles et ne se développent que sur les radicelles ( traits rouges ) . 2 types d 'ectomycorhize ont été trouvés - dont je ne pourrai pas vous fournir les noms - Si vous venez à en chercher vous constaterez que la présence des champignons n’est pas vraiment massive et nécessite une grande vigilance . Première espèce trouvée – ( flèches rouges de la photo précédente ) Coupe transversale et longitudinale ( pour faire ces coupes il a été nécessaire de réaliser une double imprégnation -d’ abord dans l Agar de façon à pouvoir orienter ces échantillons minuscules (: -l’ agar refroidit lentement et reste transparent ) puis inclusion de l’ échantillon d’ Agar après déshydratation dans la paraffine ) . Coupe longitudinale de l’ ectomycorhize Coupe transversale de l’ ectomycorhize A Manchon des hyphes entourant la radicelle B Structure cellulaire de la radicelle C Réseau de Hartig lieu des échanges entre le chêne et le champignon Deuxième espèce sur un autre pied de petit chêne. Coupe après double imprégnation A Manchon des hyphes entourant la radicelle B Structure cellulaire de la radicelle C Réseau de Hartig lieu des echanges entre le chêne et le champignon Schéma résumant l’ ectomycorhisation Les mycorhizes arbusculaires sont le second mode d inter relation entre lechampigon et les plantes de proximité L’ expérience de Thibault a pour base le développement de pois dans un milieu artificiel fait de vermiculite mélangée à un milieu enrichi en spores mycorhiziennes . ( vendu dans le commerce ) En A racine de pois non contaminée avec la prolifération du chevelu des poils absorbants En B pénétration des poils absorbants par des hyphes - en vision épiscopique En C (ci- dessous) pénétration d un hyphe dans un poil absorbant L’hyphe va s’étendre dans les cellules corticales des racines Dans ce type de mycorhize le champignon ne cherche pas à envelopper les cellules de l’ hôte ( comme on la vu auparavant ) mais y pénètre sans trop perturber les structures Ce champignon va donc développer deux systèmes - extérieur où il envahit le sol adjacent dans toutes les directions Il réalise une énorme zone de contact avec le sol - intérieur avec un réseau d’ hyphes qui se termine dans les arbuscules qui sont les lieux d’ échange entre l ‘ hôte et le fungus Pour continuer cette partie du sujet je vous engage à reprendre l article de Thibault http://forum.MikrOscOpia.com/topic/12702-endomycorhizes/?do=findComment&comment=43397 Pour en savoir plus sur la mycorhization Les Mycorhizes la nouvelle révolution verte de Andé Fortin et coll ( édition multimondes )

Elle apparaît sous une forme tubulaire d’un diamètre évoluant autour de 30 / 40 µm .) - zone A - Les fibres apparaissent collées les unes aux autres . La présentation avec l' éclairage en fond noir constate que les fibres se comportent comme des fibres optiques : ] La fibre de lin s’ est différenciée au sein du parenchyme cortical pour prendre un structure tubulaire comme le confirme cette dernière photo Mais sa croissance n’est pas finie - A suivre ( pour la petite histoire dans le coin c'est aujourd'hui le 23 juin la fête du lin normand - le lin est fleuri en général mais le champs étudié ne l'est pas encore )

Le 16 juin La croissance du lin est rapide en 1 mois les tiges atteignent maintenant entre 40 et 60 cm La structure interne a déjà bien changé : La première constatation est la création d’un vide central ; le parenchyme médullaire s’ est dissocié et se réduit à des travées cellulaires délimitant des lacunes . Le parenchyme cortical devient le lieu de développement d’une structure, nouvelle où vont se développer les fibres (3) Coupe longitudinale 1 Cuticule ou épiderme . 2 Parenchyme cortical - ou écorce. 3 Faisceaux de fibres en constitution . Dès cette période la structure des fibres commence à se révéler :

Le lin --- 1- au printemps Le lin a eu du mal à pousser cette année dans la région - le froid et la température ont créé un retard de prés de 3 semaines Le 14 mai il est à 10 cm Les coupes sont faites au Ranvier et la coloration avec le vert d Etzold Coupe en A - le centre de la tige ( X 150) Coupe en B (X100 ) Coupe B grossissement 400 ( zone vasculaire ) Le but de cette observation va être de suivre sa croissance jusqu’ au rouissage pour répondre à la question qu’est ce qu ‘ une fibre de Lin au microscope ? A Suivre …..

Merci tous les 3 Le plus difficile a été de faire la coupe de l ‘épine car l ‘intérieur ne s’est pas remplie de paraffine malgré un bain dans la paraffine à 56 pendant 2 jours- ; de ce fait le microtome tendait à fracturer la structure . La deuxième difficulté a été de trouver les bons paramètres pour les durées d’ action des 3colorants ( hemalun – fuscine de ponceau –vert lumière ) du trichrome de masson - qui en fait se sont révélés différents du protocole surtout quant à leur durée d’ action . En fait le hérisson d’ Europe est en voie d’extinction - Si théoriquement il peu vivre 10 ans les comptages actuels ne trouvent plus guère que des sujets de 2 à 3ans . Amicalement -

A la partie inférieure du derme il existe un muscle qui se développe sur toute la surface de la zone dorsale du herisson : le pannicule carné Il est responsable de la couverture complète du hérisson quand celui-ci se met en boule . Il permet la remise en place de la peau quand il reprend une attitude de repos Ce muscle se renforce en périphérie formant un bourrelet . Comment se forme l’épine Je n’ ai pas trouvé de texte sur ce sujet - mais les images qui suivent permettent d’ évoquer l’ hypothèse suivante : La première image montre deux zones particulières : -Zone périphérique cornée - faite de keratinocytes aplatis et tassés de manière compacte -Zone centrale faite de Keratinocytes actifs - qui forment de longues colonnes cellulaires irradiant du centre vers la périphérie. Ces ketatinocytes actifs sont disposés en longs rubans formés de deux couches cellulaires - Les keratinocytes y prennent un aspect palissadique, disposés en ruban. Les rubans épousent la forme des futurs prolongements internes qu ils vont modeler en se transformant -, en s’ aplatissant comme il s ont l’ habitude la faire dans la peau pour la formations du stratum cornéum . La structure ainsi constituée ressemble aux voûtes des cathédrales gothiques ( revoir la photo A ) d’où l’ extrême résistance des épines du hérisson . Coloration – Hématoxyline / Fuscine de Ponceau Pour en savoir plus sur le hérisson La hulotte N° 77+++ http://animaux.org/herisson-europeen.htm http://www.dinosoria.com/herisson.htm ++ Dominique

L implantation des épines et leur mode de fixation dans la peau expliquent qu ‘ il est possible de soulever un hérisson en le tenant seulement par une seule épine -.Il est d’ ailleurs très difficile d’ arracher une épine de la peau d’ un hérisson , elle casse bien avant . L ‘image C montre que la partie intra épidermique est arrondie- Ce bulbe a deux avantages il assure un excellent ancrage et il permet aux épines de s’enfoncer dans le prédateur côté pointu sans léser la peau du hérisson côté arrondi . Coloration au trichrome de Masson En 1 il existe un muscle peaucier dont le rôle est d’ orienter l’ épine . Ce muscle se fixe d’ un seul coté Son but est de redresser l’ épine ou de l’ abaisser L’ ensemble des piquants est érigé pas contraction du pannicule carné ( voir plus loin ) mais individuellement chaque épine a son système de contrôle. En - 2 - le tissu graisseux s’ accumule sous la zone hypodermique -; Cette graisse joue le rôle d’ isolant et de réserve pour la période d’ hibernation qui s ‘étend de septembre à fin février. Cette photo passe presque exactement au centre du bulbe et révèle que l’épine est ouverte par le dessous Cet orifice permet le passage du système vasculaire qui va alimenter la structure cellulaire interne que nous allons rencontrer dans quelques instants . Sur la droite une épine a été coupée peu après le début de sa formation - en effet les épines ne sont pas systématiquement perpendiculaires au plan cutané et peuvent démarrer inclinées dans le tissu hypodermique . Cette image met en évidence la présence de bourgeons dormants - qui en se développant plus tard vont permettre le remplacement des vieilles épines après leur chute .

le poil - le hérisson - N° 3 Cet article fait suite aux deux précédents sur le poil animal: http://forum.MikrOscOpia.com/topic/12194-le-poil-variations-sur-le-theme-la-taupe-n1/?hl=%2Ble+%2Bpoils http://forum.MikrOscOpia.com/topic/12507-le-poil-structure-generale-n-2/?hl=%2Ble+%2Bpoils ****************************************************************** Le hérisson a deux types de poils -Les poils du ventre de la tête et des pattes -Les poils du dos : Les poils du ventre sont semblables à ceux des autres mammifères avec la cuticule la corticale et la médullaire - La synthèse de mélanine se fait de manière régulière ( sauf à la partie initiale de la croissance du poil. Les poils du dos sont la caractéristique de ce petit animal Il y a entre 5000 et 7000 piquants sur chaque hérisson - La durée de vie de chaque piquant est de 18 mois ; après quoi ils tombent et sont remplacés par des nouvelles épines - comme le font les cheveux . La coloration de l’épine - donc la mélanisation de l’ épine dépend de l’age du hérisson : Pour un hérisson de moins de 1an le piquant est sombre au milieu et clair aux deux bouts le vieux hérisson a les piquants entièrement bruns . La structure du piquant va expliquer pourquoi il est à la fois ultra résistant rigide - difficilement déformable – La relative élasticité permet cependant l’amortissement du choc lors de la chute du hérisson Les épines se plient un peu et encaissent le choc . La structure interne e de l ‘ épine est en partie creuse avec des barres de soutènement (voir schéma et Photo B ) Deux niveaux -- périphérique avec des arches de consolidation - ¨Photo A -- centrale avec une structure plus aléatoire et en partie vide Photo B Le poids d’une épine est entre 4 et 9 mg soit un poids moyen de 6 mg soit pour 5000 épines 30 g et 42 g pour 7 000 – l’ animal en fin d’ été pèse entre 0,5 et 2 kilos suivant l’ alimentation ( - s’il ne pèse pas plus de 450 g il ne pourra pas passer l’ hiver ).

Bonsoir jean- Luc La vraie difficulté est l ‘obtention d’un microtome , le mien date des années 1920 et fonctionne très bien , je l’ai obtenu grâce à un heureux hasard . Les appareils modernes sont vendus fort chers et à ma connaissance du matériel Chinois équivalent ,comme pour les microscopes ,ne semble pas disponible (ce qui est vraiment dommage) . Car les préparations d’histologie ne sont pas trop difficiles à réaliser (par contre les échecs sont nombreux comme dans les autres branches de la microscopie) . Le matériel de base est une plaque chauffante type chauffe plat ; tout ce qui est nécessaire se trouve dans la cuisine . Les produits sont d’accès facile grâce à Marcel Lecomte sans qui tout cela ne serait pas possible. La littérature n’est pas difficile à trouver. Après il faut de la patience ce qu 'un amateur possède . Mais reste toujours le problème du Microtome .......; L histologie est pourtant une porte de la connaissance très intéressante à franchir . Dominique

C’est cette rotation qui est à l’ origine de la fabrication des colonnes ou papillomes : les couches successives renforcent les parois des colonnes ( mais la encore toutes les cellules ne subissent pas ce mouvement de rotation et un grand nombre reste parallèle au plan de base en se positionnant au centre des colonnes) . L’étape suivante – nous rapproche du sommet de l’édifice . L ‘ empilement des cellules se fait comme pour la stratum corneum de la peau normale mais à la fois dans le sens verticale et dans le sens lateral : les papillomes de développent . Le mouvement de rotation décrit ci –dessus va persister pour un certain nombre de keratinocytes jusqu ‘au sommet du papillome : conséquence des boules compactes vont se former . Ces boules ainsi que les autres cellules arrivant la fin du processus de transformation vont desquamer et tomber sur le sol . Les boules de keratinocytes ,très riches en virion , vont permettre à ces derniers de résister aux agents externes dont les UV et les agents chimiques une fois sur le sol des piscines - Dans les piscines l’épithélium des pieds est fragilisé par l’eau le virus contaminera un pied nouveau . La fin de l’ histoire. Les verrues ( parfois au bout de quelques années) disparaissent de la peau .- Le système immunitaire du porteur travail 24 h sur 24 autour des particules virales pour trouver la structure de l’anticorps adapté aux antigènes viraux et il arrive à trouver la clef ( mais pas toujours ) . Le système circulatoire , important au centre de la verrue , permet une communication entre la verrue et le reste de l’organisme . La verrue est ainsi nourrie mais c’est aussi le moyen que l’ organisme va utiliser pour apporter les lymphocytes producteurs des anticorps anti-viraux . Le papilloma virus Verrues vulgaire papillomavirus 2-4-29-75-76-77 Verrue plane 3—10—28 Verrue intermédiaire 10-26-27-28-29 Verrue des bouchers 7 Annexe Structure histologique de la peau Dominique

La différence entre le stratum basal et le stratum spinosum n ‘est pas aussi bien marqué que dans une structure saine ( voir annexe ) . Il existe une désorganisation très importante ; les transformations des keratinocytes sont parfois très rapides, presque dés la basale , parfois nettement plus tardives ; désorganisation mais pas anarchie , simplement le génome viral exprime sa « pensée » architecturale propre. Apparaissent aussi d’étranges cellules - dont le centre est ballonné . Les koilocytes - (cette transformation n’atteint pas tous les keratinocytes) Cette transformation pathologique du keratinocyte est le signe de la présence d’un Virus de la famille des papillomavirus. Sous l’effet du transfert du patrimoine génétique du virus vers le chromosome des keratinocytes – le plan de développement du ketatinocyte est modifié . Cette modification apparaît donc dans la forme de cette la cellule mais aussi dans son processus de transformation . Les images suivantes montrent le phénoméne. Normalement les keratinocytes vont se déformer pour devenir comme des tuiles - posées parallèlement au plan des cellules de base et ainsi former le stratum corneum protecteur . L’ image en contraste de phase – montre que les cellules se mettent à se déformer dans un plan perpendiculaire au plan de base . Gros plan sur la zone de transformation

La verrue vulgaire - Histologie (Avertissement : : pour la première fois j’ ai fait le chemin complet du prélèvement tissulaire à l’ examen microscopique ; -ce n’est pas un chemin facile et les embûches existent à tous les niveaux de la technique : prélèvement ,– fixation ,– déshydratation ,- inclusion , - préparation du microtome ,– coupe , - étalement , - préparation à la coloration –, coloration , montage ) je suis encore très loin de la maîtrise …surtout pour les colorations ……ici hematoxyline / eosine ou phloxine ) La verrue est ma première observation d ‘ histologie. ------------------- Un patient est venu en boitant à la consultation .Depuis plusieurs semaines il a sous le pied une tuméfaction à peine saillante . L’aspect est sans discussion celui d’une verrue plantaire commune mais d’une taille peu habituelle . L’ azote liquide ne fonctionne pas sur les verrues plantaires – en effet le fait de marcher dessus empêche le décollement . . Les pommades à base d’acide salicylique sont d efficacité lente ( plus de 1mois ) et nécessite une grande discipline . Il est décide de faire une anesthésie locale et de lui enlever à la curette . Ce qui se fait sans problème. Aspect macroscopique Côté externe de la verrue ]Côté interne de la verrue ( celui qui est inclus dans la peau ) Ces images montrent que la verrue n’a pas de racines au sens où la tradition la présente ( c’est à dire comme un arbre qui s’ incruste dans le sol –) La base de la verrue est très lisse . Préparation histologique aspect général Cette image n° 3 permet de constater deux choses -- A - la confirmation de l’ absence de racine , le plan de clivage est net ; c’est la raison pour la quelle il n’est pas difficile de retirer une verrue avec une curette - :il suffit de la pousser ( après anesthésie locale ) . --B - la verrue est formée de colonnes , les papillomes , les uns contre les autres . Etude de la structure de la verrue . Pour bien comprendre le mécanisme interne d’une verrue il faut toujours penser que la verrue est une structure en mouvement continu de la base vers le sommet - l’image n° 3 est en fait une représentation du temps - ( quelques semaines ) où la cellule fondamentale de la peau: le kératinocyte va se transformer . L ‘histoire commence donc à la base ( parti incluse dans la peau ) Le keratinocyte basale - ( 1 ) est semblable à celui de la couche du stratum basal d’une peau normale ( voir annexe ) - à la différence prés que sous une couche de quelques cellules il existe une zone de clivage. L’organisme grâce à son système immunitaire a mis une cloison entre la verrue et le reste de la peau tout simplement en aplatissant ( le phénoméne est peu visible sur cette photo) les keratinocytes comme dans la couche superficielle du stratum cornéum . Cette zone basale est le lieu de mitoses qui permettent le renouvellement des cellules et la croissante de la verrue . Au dessus ( 2 ) Se trouve le stratum spinosum ; ( voir annexe ) dans cette couche les keratinocyte sont liés par des ponts inter cellulaires ,les desmosomes qui assurent la solidité de l’ ensemble .Ces desmosomes structurent l’é pithélium normal et le renforce de façon à résister aux agressions externes . Ici il structure la base de la verrue rendant l’ensemble très résistant .

Schéma récapitulatif idéalisé (dessin de la photo 2) 1 –Conidiophore lisse sans renflement pouvant atteindre 400 µm . 2 –Ramoconidies plus ou moins cylindriques uni ou bicellulaires. 30 µm x 3-5µmCes structures ont plusieurs sites conidiogénes 3—Conidies elliptiques ou citriformes – généralement unicellulaire à croissance acropetale de 3-11x 2-5 µm – Isolées ces cellules portent la ou les cicatrices insertion La fragilité des structures sporifères, la présence dans les préparations de fragments de conidiophores allongés et de conidies de formes et de dimensions variées sont souvent caractéristiques de champignons du genre Cladosporium . Classification Fungi Ascomycota, Pezizomycotina, Dothideomycetes, Dothideomycetidae Capnodiales Davidiellaceae Cladosporium 704 espèces enregistrées Ici probablement Cladosporium cladosporioides ( très commun et cosmopolite Cette moisissure est présente dans l air le sol sur les peinture – les graines les céréales , les matières végétales en décomposition (on l’ a déjà rencontré dans la présentation sur le pain des boulangeries du canton ) .-ici- L ‘ extrême pouvoir de fragmentation associé aux caractères antigéniques des protéines de surfaces des spores en font un agent responsable des allergies . Le petit garçon du début de cette présentation a développé une allergie à cette moisissure . Le père a décidé de refaire l’isolation de la pièce unique possibilité de guérison. . Une aération correcte de la pièce –( intérêt des VMC ) est aussi une bonne prévention . dominique

N° 4 X400 cp Les formes ne sont pas semblables .Si la disposition des éléments est assez fluctuante,les mêmes piéces du puzzle sont retrouvées sur chaque conidiophore (voir schéma plus loin) . Les hyphes Ils sont de deux types Les hyphes aériens : Les hyphes du milieu immergé: Les Spores Les spores de cladosporium sont de deux types. – monocellulaire et bicellulaire - Elles sont vues ici entrain de bourgeonner La structure des spores a été à l’origine de la discussion avec Michel ( page de 11 de l’ article) -ici- Celui-ci a présenté une image remarquable quasi en 3D de la dépression centrale J’ai fait ce que j’ai pu mais c’est nettement moins bien (X1000 –fond clair – éclairage oblique) Deux éléments: 1 la dépression centrale. 2 le séquelle de la zone d insertion à la précédente spore - puisque ces spores ont une croissance acropetale (voir dessin) .

Image obtenue par la technique du papier collant en drapeau . Des fragments sont obtenus mais la totalité -de la moisissure. reste inobservable. Les manipulations se sont suivies sans aucun succès : dés que l on touche, même d’une manière infime, à cette structure elle se désagrége comme un puzzle qui tombe sur le sol . Que faire ? L ‘idée a été de faire pousser cladosporium dans un bac à coloration Un ruban de scotch est préalablement fixé sur les lames. Celles ci sont posées perpendiculairement à la surface :-l’ espoir est que la moisissure va croître parallèlement - et y adhérer . Sur la photo le petit liseré noir est bien visible qui montre quelques éléments collées . La préparation cette plaque se fait comme d’ habitude :Bleu coton Lactophenole -mais là encore la moisissure se désagrége au contact des produits de coloration . Il restait une solution : examiner la plaque sans utiliser de préparation ni de lamelle - ce qu ‘autorise le contraste de phase. Avec pour compléter la réalisation d’un stack de 10 images pour chaque plan . La structure aérienne : conidiophores +conidies Photo N°1 X 200 cp N° 2 X 400 cp N° 3 X 400 cp

L ‘histoire commence par l’observation de Michel qui a constaté sur le mur de sa cuisine la présence d’une plaque noir a développement rapide . - ici - Quelques jours plus tard en clientèle une maman apport son garçon de 5 ans pour une toux nocturne persistante - depuis plusieurs mois . Curieusement il ne tousse pas s ‘il va coucher chez des amis . Au cours d’une visite la maman m’autorise à faire une photo du mur de la chambre suivi d ‘ un prélèvement avec un papier scotch . Résultat après 72 heures de mise en culture sur milieu de Sabouraud . Le papier collant ayant été mis au contact de la surface du milieu : 1 - Penicillium 2 - Cladosporium Episcopie après 48 heures x 100 Episcopie après 72 heures x100 Jusqu à ce point cette observation ne présente pas de grandes difficultés. Tout se complique à partir du moment où la moisissure doit être regardée au microscope.

Pour les cellules filles qui viennent juste de se diviser la croissance se fait dans la zone opposée à la zone de division ( ce qui explique la forme en poire de certaines levures . L’ examen comparatif avec Saccharomyces cerivisiae constate l’ absence de la grosse vacuole centrale Par contre on va retrouver : -la même difficulté pour la mise en évidence du noyau . -la présence de nombreuses vacuoles aux couleurs multiples - alors que je n’ai utilisé aucun colorant. Les cycles végétatifs sont en général haploïdes mais, dans certaines conditions, notamment lorsque les conditions nutritives deviennent défavorables, deux cellules peuvent fusionner si elles présentent les types sexuels opposés h+ et h-, ce qui aboutit à un zygote susceptible de donner un cycle végétatif diploïde. Les cellules diploïdes peuvent aussi subir la méiose et donner quatre ascospores à l’origine de nouvelles cellules haploïdes. Wikipedia nous enseigne que cette levure a été isolée de la bière de millet Elle est utilisée en tant que model biologique comme Saccharomyces cerivisiae . Son génome a été réalisé en 2002 . Il existe 120 variétés de Saccharomyces pombe trouvées en majorité sur les pommes et les raisins . Classification Fungi ,Ascomycota, Saccharomycotina Saccharomycetes Saccharomycetidae ,Saccharomycetales, Saccharomycetaceae, Saccharomyces Saccharomyces pombe J’ai obtenu cette souche auprès de la société Sordalab Pour aller plus loin http://www.didier-pol.net/4pombe.htmn un très bon texte didactique +++++ Annexe J’ai rencontré un probléme Lors de l’ exploration d’une culture agée j’ ai trouve le structure suivante Au cours de la présentation de la levure Candida albicans - il avait été notée la possibilité pour candida de former des pseudo hyphes . Le problème vient de ce que je n’ai trouvé aucun texte parlant de cette possibilité pour saccharomyces pombe qui pourtant est présente ici ( aucune contamination possible ) . Dominique

Saccharomyces pombe La levure de boulanger nous donne l’image que l’on connaît tous des levures -,-c’est à dire des structures ballonnées - rondes qui se multiplient par bourgeonnement. Ce n’est pas le cas de toutes les levures. Parmi les atypiques il existe Saccharomyces pombe . La mise en culture ne montre pas d’ originalité - une culture de couleur crème qui pousse en 48 heures à 30 ° sur milieu de Sabouraud . L examen en fond clair (mais lumière oblique) révèle un aspect inhabituel (toutes les photos sont à X 1000 immersion). En contraste de phase La levure peut prendre différentes formes - mais dans l’ensemble elle apparaît allongée - autour de 3 à 4 µm de large pour 6 à 15 µm de long . La taille va dépendre du stade où se situe la levure dans son processus de multiplication . Elle peut atteindre 13 à 14µm lors de sa phase de division et 6 µm pour une cellule fille en début de cycle . Le mode de reproduction est particulier - puisqu elle se divise par son milieu (- ici il n’ existe pas de bourgeonnement ). L’examen de Saccharomyces pombe constate une nette tendance à la bipolarisation des vacuoles . L ‘explication de ce phénomène est le mode de croissance qui se fait par les extrémités .

Encore une autre espèce ci-dessous. Dans cette photo on retrouve en 1 Ulothix et à coté en 2 une algue que l’on va retrouver sur le second site qui pourrait être une Pleurotaenium ( en effet la liaison entre deux cellules est de la même structure inhabituelle ) . Soit Cinq Algues entremêlées dans le site de Gisay la coudre . Dans le prélèvement situé sur la commune de la Barre en ouche - 4 algues sont retrouvées . Cette algue est du genre Zygnema. La cellule fait environ 14 à 20 µm de large et25 à 100 µm de long. Enfin dans la photo ci – dessous on trouve deux autres algues En A une Klebsormidium En B Une Pleurotenium ?que l’on a déjà vue dans le fossé de Gisay ; le trait curieux de l’ algue ici présentée est la jonction entre deux cellules ; cette jonction semble faire un voile qui se recourbe vers l’ intérieur de chacune des cellules adjacentes ( trait rouge ) . Pour terminer ce petit tour d’horizon un mot des habitants des lieux Sur le site de la Barre presque personne -sur celui de Gisay un grand nombre de protistes ( pas facile à photographier ils bougent sans arrêt et passent leur temps à se rétracter - on y reviendra plus tard ). Mais pour fêter le printemps qui devrait arriver- ( au moment ou j’ écris il neige sur la Normandie ) je vous présente un bouquet de Vorticelles à défaut de fleurs . Ref pour les algues : Protist Image Database , Dominique

Le printemps - les premiers signes . Ce n’ est pas vraiment évident en ce début du mois de mars (Photos prises le 9 mars) – pourtant il y a dans la campagne de petits signes annonciateurs . Des perces –neige - des primevères – quelques feuilles de jonquilles font leur apparition. Et surtout l’ eau stagnante perd de sa transparence cristalline caractéristique de l’ eau froide hivernale pour prendre doucement son aspect trouble des beaux jours. A certains endroits il y a même déjà l’ apparition de plaques vertes sur le bord des mares et des fossés – L’eau est pourtant froide - 8 °C au moment des prélèvements. (Sur le deuxième site la richesse en algues est due à la ferme proche qui alimente en matières organiques.) Dans les prélèvements il y a plusieurs espèces d’algues . Qui rencontre- t-on ? (Avertissement :- je ne suis pas certains des noms mais j’ai fait de mon mieux) Les photos sont prises au x 20/oculaire 10. Site de Gisay la Coudre L’algue N° 1 semble être une Vaucheria L algue N°2 présente sur le bord des cellules des denticules mieux visibles en contraste de phase –( trait rouge ) nature de ces denticules ? Dans ‘l’image A, ci-dessous, la spire centrale oriente vers une Spirogyre Par contre l’ image B reste sans nom ( ce qui apparaît le plus approchant serait des algues de l ordre des cladophorales .

Bonsoir Rouzejp Merci pour ton appréciation . Mais il était moins une que je ne trouve pas l image de la transformation de la levure en hyphe - - .J étais sur le point de vider le contenu de la boîte quand pris d’un remord soudain j’ ai jeté un œil Amicalement

Pseudo hyphes et Hyphes . ( Partant de l’ idée que Candida forme des hyphes dans le sérum sanguin j’ai refait l’ expérience avec Saccharomyces cerevisiae - - résultat : pas d’ hyphe mais quelques cellules qui s’ allongent ,ce qui reste surprenant tant ce milieu est éloigné de son milieu habituel )ci-dessous une photo A où la cellule s’ allonge et une photo B où les levures restent unies entre elles (.Il est parfois visible de grosses agregations de plusieurs dizaines de levures avec leurs bourgeonnements; cette tendance à l ‘agrégation va favoriser la floculation des levures ( propriété appréciée par les brasseurs ) - Juste avant de boucler cette courte présentation j’ ai jeté un regard sur une vieille culture de levure - réalisée le20 janvier sur milieu gélatine - En 27 jours la gélatine est redevenue liquide , - l’ ensemble a un caractère trouble, il existe une importante colonisation bactérienne Mais - :résultat ci – dessous de superbes hyphes : Le lent appauvrissement du milieu à conduit la levure à se modifier . Saccharomyces cerevisiae Classification 1. Fungi 2. Ascomycota 3. Saccharomycotina 4. Saccharomycetes 5. Saccharomycetidae 6. Saccharomycetales 7. Saccharomycetaceae 8. Saccharomyces 9 .Saccharomyces cerevisiae Références Les organismes modèles :La levure Pierre Thuriaux -ed Belin sup Travaux pratiques de Biologie des levures Didier Pol ed Ellipses (++++) Dominique

Les vésicules - Dès les premiers contacts avec cette levure à travers le microscope , une fois la surprise de la grosse vacuole centrale passée , l’ attention est attirée par de multiples petits points qui entourent cette vacuole . On constate que le contenu des vésicules prend des couleurs variables suivant les colorants utilisés - en 4b il est possible de trouver au moins 4 couleurs qui correspondent à des conditions physico- chimiques différentes - Si toutes les levures n’ont pas la possibilité de fermenter , la levure de boulanger possède cette propriété de ce fait certaines des vésicules contiennent de l’ alcool - et rejette du gaz carbonique - En 2C les vésicules d’un vert lumineux sont présentes aussi dans les 4 autres images et sont le type le plus souvent rencontré -- nature chimique ? Ces vésicules sont soit des vésicules de stockage soit des vésicules de secrétions (issues de l’appareil de Golgi). Les vésicules de stockage Les phénomènes d’importation, d’exportation et de recyclage de diverses substances vont utiliser les vésicules de stockage. Expérience avec le Rouge neutre : La succession des photos suivante montre la lente progression du rouge neutre vers ce type de vésicules (X1000 – Rouge neutre -champ clair). Première constatation le colorant n’est pas reparti identiquement selon les cellules En fait les cellules jeunes et les cellules âgées n’accumulent pas le colorant à la même vitesse . La reproduction Comme chez les moisissures il existe deux systèmes : Dans la boite de culture de 3 jours l’ aspect met en évidence la reproduction par le système de mitose simple les cellules bourgeonnent - le bourgeon porte le nom de Blastospore . Après 8 jours le milieu nutritif commence à s’épuiser on observe -le système méiose/mitose qui va donner les asques – ces asques contiennent 4 spores( photo 2 et 3 ) ( parfois moins s’il y a non développement d’une des spores - comme sur la photo ci-dessous n° 1 -A et n° 4 ) La photo 1 met cote à cote ( par hasard ) les deux systèmes de reproduction ( sexuée A et asexuée B ). Précisions 1 --La différence mâle /femelle est remplacée chez les levures par la dénomination MAT A et MAT alpha - on aura donc des cellules a et alpha ( on parlerait de gamètes chez les mammifères) et des cellules a/alpha . 2 –le mot végétatif peut être remplacé par le mot asexué (réplication par simple mitose) . -3-Seul les cellules diploïdes vont subir une Méiose .

La levure de boulanger (ou de bière son autre nom ) Préambule Un aspect technique sur ce sujet déjà été traité dans ce forum- -ici- et ici Cette présentation l’ aborde sur le mode aspect anatomique. La levure de boulanger - sous son air populaire est une des plus grandes stars de la biologie moderne - Cet eucaryote est utilisé depuis plus de 50 ans comme modèle d’ étude - Les publications sur ses particularités sont de plusieurs milliers par an . Mais sa rencontre, pour un néophyte, ne va pas être aussi facile que prévue . Premier pas aller chez le boulanger acheter 50 grammes de levure fraîche - Le premier abord est un peu décevant l’ aspect est celui d’ une masse grise friable d’ odeur fade. La mise en culture se fait simplement ( Principe : diluer quelques morceaux dans un peu d’eau et ensemencer une boite de Petri ). Préparation du milieu de culture Mélanger en agitant longuement 5 g de levure de boulangerie avec 100ml d’eau et un cube de bouillon de boeuf . Porter à ébullition pendant quelques minutes . Ajouter 20 g de sucre en poudre et compléter à 1 litre avec de l’eau . Bien mélanger Reporter à ébullition pendant quelques minutes -( cette manière de faire va transformer le saccharose en glucose et fructose - ce qui ici n’est pas bien important - par contre pour les etudes de biochimie il faut se reporter au protocole de Didier Pol voir références ) . Filtrer avec un filtre café (utiliser un filtre permanent de cafetière électrique+papier filtre - sinon c’est galère). Prélever 100 ml de ce bouillon et y mélanger une feuille de gélatine alimentaire ( 2grammes ) découpé en petits morceaux ( ceci est la formule de Didier Pol )–mais le résultat est meilleur à mon avis si on utilise l’ Agar à raison de 1 g pour 100 cc ) Porter à ébullition jusqu’ à dissolution complète de la gélatine ou de l Agar et laisser refroidir un peu. Verser le milieu dans les boites de Petri 20 cc par boite et placer au réfrigérateur jusqu à gélification du milieu (Ref). Mise en culture Mélanger 1 g de levure de boulanger avec 100cc d’eau tiède et 1 g de sucre Bien agiter et laisser reposer 1 heure. Prélever un peu de cette suspension, avec un compte goutte après l’avoir bien agitée Mettre une goutte de la suspension dans 1 litre d’eau - bien agiter . Avec un autre compte goutte prélever un échantillon de cette suspension diluée . Ouvrir la boite contenant le milieu et toucher la surface du milieu avec l’extrémité du compte goutte en une dizaine d’endroits différents (Ne pas laisser tomber de goutte si possible) refermer le couvercle . Laisser la boîte à température ambiante dans un endroit tiède . Premier aperçu 72 heures après. La forme des levures Les levures sont comparables à des ballons plus ou moins de type rugby La taille d’une levure : est assez variable allant de 5 à 12 µm en longueur et 5 à 9 µm en largeur . La levure est donc la plus petite des cellules eucaryotes ; les cellules de levure ont une taille nettement inférieure à celle des plantes et des animaux .la photo 1 ci-dessous met en évidence la taille respective d’une bactérie et de levures - le fait marquant est leurs variétés de formes et de tailles . L’ observation au microscope constate que la grosse vacuole centrale peut jouer le rôle de loupe - et souvent à travers celle-ci on peut voir danser les bactéries qui sont justes au dessous et que l’on pourrait croire être à l’ intérieur de la levure . Les parois Les parois des levures sont épaisses , elles peuvent représenter de 6 à 30 % poids de la cellule Cette paroi est constituée d’au moins 3 couches. Les deux couches les plus internes sont constituées de polymère du glucose ( le glucane .et le mannane ) la chitine ne représente que 1% de la paroi des levures La coloration au bleu de Nil permet de différencier les 3 parois, colore le cytoplasme en bleu clair et la grosse vacuole centrale en bleu plus sombre .le noyau ?? est légèrement violet . Le Noyau Il est difficile à observer - la vacuole centrale le repousse en périphérie ou le masque. Parmi les colorants le plus efficace est le bleu de Toluidine – mais il y en a sûrement d autres ( j’ai lu que le Giemsa marche bien mais dans cette observation cela n’ a rien donné ) . Le contraste de phase permet par contre de mettre en évidence cette structure plus facilement .

Bonsoir Mpx Cette habitude a été abandonnée – L ‘idée initiale était bonne : le candida profite toujours de l’ espace laissé par les bactéries détruites par les antibiotiques - mais cliniquement cela n’est pas trop gênant ou du moins pas souvent -vu la quantité phénoménale d antibiotiques distribués et la faible fréquence des mycoses secondaires . Cet effet est d’ ailleurs variable suivant les molécules utilisées . La politique maintenant est de traiter non préventivement mais en seconde ligne -ce qui a l ‘ avantage de limiter la résistance des levures aux antifungiques -Les levures posent le même problème que les bactéries - elles se mettent à résister à nos molécules -De ce fait certaines mycoses -( dues au candida entre autres ) - sont désormais difficiles à maîtriser et comble de malheur il n’ y a pas vraiment de nouvelles molécules sans risque d’ utilisation à l’ horizon - Pour la bouche les antiseptiques modifient les équilibres mais le candida ne semble pas en profiter - On ne constate pas plus de muguet chez les utilisateurs de bain de bouche Amitiés